本文關鍵詞：Notch1胞內結構域真核表達質粒構建及在H9c2心肌樣細胞的表達和生物學功能

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【摘要】：目的構建Notch l胞內結構域(N1ICD)真核表達質粒,確定能在H9c2心肌樣細胞內表達,并發(fā)揮生物學效應,為后續(xù)Notch1信號通路的研究提供實驗依據。方法設計并合成1對含有BamH I和EcoR I酶切位點的特異性引物,以小鼠cDNA文庫為模板,經PCR擴增得到了1 122 bp的目的片段,定向克隆至pcDNA 3.1/myc-His質粒,構建pcDNA3.1/N1ICD-myc-His真核表達質粒。通過雙酶切及基因測序鑒定,經Lipofectamine 2000轉染至H9c2心肌樣細胞,48 h后提總蛋白,Western-blotting檢測myc和Hes1,確定N1ICD能在H9c2細胞表達,并啟動下游基因表達。結果表達質粒pcDNA3.1/N1ICD-myc-His雙酶切及基因測序正確,N1ICD可在H9c2心肌樣細胞內高效表達,具有Notch1生物學效應。結論真核表達質粒pcDNA3.1/N1ICD-myc-His構建成功,為Notch1信號通路在心血管領域的功能研究奠定了基礎。
【作者單位】： 南昌大學第一附屬醫(yī)院心臟外科;
【關鍵詞】： Notch信號通路 胞內結構域 質粒構建 Hc心肌樣細胞
【基金】：國家自然科學基金(No:81260024) 江西省研究生創(chuàng)新專項資金(No:YC2011-B013)
【分類號】：R363
【正文快照】： Notch信號通路為鄰近細胞之間信息交流平臺,在心臟中的突出作用不容忽視,它不僅調節(jié)胚胎期心臟的發(fā)育和分化[1],而且刺激未成熟心肌細胞的增殖[2],促進靜止期心肌細胞重新進入細胞周期,有利于損傷心肌的再生修復[3]。最新研究發(fā)現(xiàn)Notch1信號通路的激活可加快心肌梗死后期心功

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本文編號：934230