本文關(guān)鍵詞：Notch1胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建及在H9c2心肌樣細(xì)胞的表達(dá)和生物學(xué)功能

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【摘要】：目的構(gòu)建Notch l胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(N1ICD)真核表達(dá)質(zhì)粒,確定能在H9c2心肌樣細(xì)胞內(nèi)表達(dá),并發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng),為后續(xù)Notch1信號通路的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法設(shè)計(jì)并合成1對含有BamH I和EcoR I酶切位點(diǎn)的特異性引物,以小鼠cDNA文庫為模板,經(jīng)PCR擴(kuò)增得到了1 122 bp的目的片段,定向克隆至pcDNA 3.1/myc-His質(zhì)粒,構(gòu)建pcDNA3.1/N1ICD-myc-His真核表達(dá)質(zhì)粒。通過雙酶切及基因測序鑒定,經(jīng)Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染至H9c2心肌樣細(xì)胞,48 h后提總蛋白,Western-blotting檢測myc和Hes1,確定N1ICD能在H9c2細(xì)胞表達(dá),并啟動下游基因表達(dá)。結(jié)果表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1/N1ICD-myc-His雙酶切及基因測序正確,N1ICD可在H9c2心肌樣細(xì)胞內(nèi)高效表達(dá),具有Notch1生物學(xué)效應(yīng)。結(jié)論真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1/N1ICD-myc-His構(gòu)建成功,為Notch1信號通路在心血管領(lǐng)域的功能研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院心臟外科;
【關(guān)鍵詞】： Notch信號通路 胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域 質(zhì)粒構(gòu)建 Hc心肌樣細(xì)胞
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No:81260024) 江西省研究生創(chuàng)新專項(xiàng)資金(No:YC2011-B013)
【分類號】：R363
【正文快照】： Notch信號通路為鄰近細(xì)胞之間信息交流平臺,在心臟中的突出作用不容忽視,它不僅調(diào)節(jié)胚胎期心臟的發(fā)育和分化[1],而且刺激未成熟心肌細(xì)胞的增殖[2],促進(jìn)靜止期心肌細(xì)胞重新進(jìn)入細(xì)胞周期,有利于損傷心肌的再生修復(fù)[3]。最新研究發(fā)現(xiàn)Notch1信號通路的激活可加快心肌梗死后期心功

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：934230