本文關鍵詞：微小RNA-1慢病毒載體介導大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞分化為心肌樣細胞的研究

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【摘要】：目的通過微小RNA-1(microRNA-1,miR-1)慢病毒載體轉染大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(MSC),探討miR-1對MSC向心肌細胞分化的影響。方法采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離培養(yǎng)大鼠MSC并進行流式細胞學鑒定;構建表達miR-1慢病毒載體;將miR-1慢病毒載體轉染大鼠MSC(MSCmiR-1)連續(xù)培養(yǎng)15d,光鏡下觀察轉染后細胞形態(tài),分別于0、4、6、15dqRT-PCR檢測miR-1、心肌相關基因鋅指結構蛋白(GATA-4)、肌鈣蛋白I(cTnI)、α肌動蛋白(α-actin)的表達;免疫熒光觀察cTnI的表達;Western blot檢測α-actin的表達。結果原代大鼠MSC呈長梭形、漩渦狀生長,流式細胞學檢測顯示,98%以上細胞表達CD44和CD29,不足1%細胞表達CD45;成功構建miR-1重組慢病毒載體,病毒滴度為3×108 TU/μl;轉導miR-1后,MSCmiR-1高表達心肌特異性相關基因GATA-4、α-actin、cTnI,并隨時間逐漸增強,轉染4d免疫熒光檢測可見cTnI在部分MSCmiR-1中表達,于15d時表達最強,Westernblot進一步證實了α-actin在MSCmiR-1中表達。結論轉導miR-1至大鼠MSC中可促使其向心肌樣細胞的分化。
【作者單位】： 南昌大學第一附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科;江西省高血壓病研究所;
【關鍵詞】： 微RNAs 慢病毒屬 間質(zhì)干細胞 轉染 肌鈣蛋白I
【基金】：江西省自然科學基金(2010GZY0321) 江西省科技支撐計劃(2010BSA11700) 江西省教育廳青年科學基金(GJJ12153) 江西省衛(wèi)生廳科技計劃(20111021)
【分類號】：R329
【正文快照】： 1970年Friedenstein首次報道,在骨髓中除大量造血干細胞外,還存在一類占骨髓0.01%～0.1%含量的具有黏附作用的干細胞,并命名為間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells,MSC)[1]。進一步研究發(fā)現(xiàn),MSC具有自我增殖及多向分化潛能,在特定條件下可分化為心肌細胞形態(tài),同時MSC能抑制T

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