本文關(guān)鍵詞：ANKIB1單克隆抗體的制備及應(yīng)用

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【摘要】：目的:制備抗人ANKIB1的小鼠單克隆抗體。方法:PCR擴(kuò)增人ANKIB1(1-480)的編碼序列,構(gòu)建pGEX-5X-ANKIB1(1-480)表達(dá)載體。在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)GST-ANKIB1(1-480),利用谷胱甘肽瓊脂糖凝膠純化重組蛋白。使用純化蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合,篩選雜交瘤細(xì)胞株,通過ELISA、Western blot和免疫沉淀實(shí)驗(yàn)鑒定抗體,并檢測(cè)ANKIB1在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果:獲得了一株雜交瘤細(xì)胞株(7A9),所分泌的抗體對(duì)人、大鼠和小鼠ANKIB1均具有很高的靈敏性和特異性。ANKIB1在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中高表達(dá)。結(jié)論:成功制備了抗ANKIB1的單克隆抗體,ANKIB1在人、大鼠和小鼠腦以及人胚腎細(xì)胞293ET中均有較高水平的表達(dá)。
【作者單位】： 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院 河南省"遺傳性疾病與分子靶向藥物"高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地;新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室;新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科;
【關(guān)鍵詞】： ANKIB 單克隆抗體 表達(dá) RBR結(jié)構(gòu)域
【基金】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院博士科研啟動(dòng)基金資助
【分類號(hào)】：R392.1
【正文快照】： 錨蛋白重復(fù)序列(Ankyrin repeat,ANK)是最常見的一種介導(dǎo)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的蛋白模體,常與F-box、鋅指、PDZ(PSD-95/Dlg/ZO-1)、離子轉(zhuǎn)運(yùn)結(jié)構(gòu)域和蛋白激酶等結(jié)構(gòu)域共存,其中F-box與蛋白質(zhì)泛素化密切相關(guān)[1-3]。RING(Really interest-ing new gene)結(jié)構(gòu)域則是E3泛素連接酶

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