本文關(guān)鍵詞：弓形蟲復(fù)合基因疫苗pcSAG1-ROP5誘導(dǎo)小鼠免疫應(yīng)答的研究

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【摘要】：目的觀察弓形蟲復(fù)合基因疫苗pcSAG1-ROP5免疫小鼠后誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答。方法構(gòu)建弓形蟲重組真核表達(dá)質(zhì)粒pcSAG1、pcROP5和pcSAG1-ROP5,分別通過PCR、酶切和測(cè)序鑒定后,轉(zhuǎn)染人宮頸癌細(xì)胞(HeLa細(xì)胞),蛋白印跡(Western blotting)分析重組蛋白的體外表達(dá)情況。70只昆明小鼠隨機(jī)均分為5組(每組14只),分別為pcSAG1組、pcROP5組、pcSAG1-ROP5組、空質(zhì)粒組和空白對(duì)照組。重組質(zhì)粒組每次每只肌注100μg重組質(zhì)粒,每2周免疫1次,共3次�？召|(zhì)粒組和空白對(duì)照組分別注射等量的空質(zhì)粒和PBS。于每次免疫前和末次免疫后2周眼眶采血,制備血清。采用ELISA法檢測(cè)pcSAG1-ROP5組小鼠末次免疫后2周的血清與重組蛋白SAG1、ROP5和SAG1-ROP5結(jié)合的效價(jià),以及5組小鼠的各次血清中抗弓形蟲抗體IgG水平。末次免疫后3周,每組小鼠取10只腹腔接種10~3弓形蟲速殖子,觀察生存時(shí)間。末次免疫后4周,采用ELISA法檢測(cè)小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中γ干擾素(IFN-γ)和白細(xì)胞介素4(IL-4)的水平。結(jié)果重組真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建成功。Western blotting分析結(jié)果顯示,重組質(zhì)粒pcSAG1、pcROP5和pcSAG1-ROP5均能在HeLa細(xì)胞中表達(dá),重組蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量(M_r)分別為31000、57000和88 000。pcSAG1-ROP5組小鼠血清與重組蛋白SAG1、ROP5和SAG1-ROP5結(jié)合的效價(jià)分別為1:320、1:160和1:2560。3個(gè)重組質(zhì)粒組小鼠血清抗弓形蟲IgG抗體水平隨著免疫次數(shù)的增加和時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸升高,末次免疫后2周,pcSAG1-ROP5組小鼠血清IgG抗體水平(0.612±0.031)顯著高于其他各組(P0.05)。攻擊感染后,pcSAG1-ROP5組小鼠的平均存活時(shí)間為(288±7)h,較pcSAG1組和pcROP5組分別延長(zhǎng)了48 h和96 h(P0.05)。末次免疫后4周,pcSAG1-ROP5組小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-γ水平[(908.52±6.31)pg/ml]顯著高于其他各組(P0.05),各組的IL-4水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論與弓形蟲單基因疫苗pcSAG1和pcROP5相比,復(fù)合基因疫苗pcSAG1-ROP5所誘導(dǎo)的抗弓形蟲IgG抗體和IFN-γ水平較高,攻擊感染后存活時(shí)間延長(zhǎng)。
【作者單位】： 海南醫(yī)學(xué)院海南省熱帶病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 剛地弓形蟲 復(fù)合基因疫苗 SAG-ROP
【基金】：海南省自然科學(xué)基金(No.809018)~~
【分類號(hào)】：R392.1
【正文快照】： 剛地弓形蟲(幾%oplaslna gondii)是一種世界性分布的專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲，可感染包括人類在內(nèi)的幾乎所有哺乳動(dòng)物，引起人獸共患寄生蟲病。目前弓形蟲病藥物治療的效果不甚理想，疫苗接種可能是預(yù)防弓形蟲病的最佳策略川。弓形蟲生活史較復(fù)雜，抗原成分多，每種抗原在體內(nèi)誘

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【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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5 孔t，

本文編號(hào)：894011