發(fā)布時(shí)間：2017-09-20 07:44

  本文關(guān)鍵詞：穩(wěn)定表達(dá)人類皰疹病毒6型U94基因血管內(nèi)皮細(xì)胞株的建立及U94對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖和血管生成能力的影響

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【摘要】：目的:構(gòu)建人類皰疹病毒6型U94基因慢病毒載體,研究U94基因?qū)ρ軆?nèi)皮細(xì)胞增殖及血管生成的影響。方法:以質(zhì)粒pSR2PH-U94為模板,PCR擴(kuò)增U94-6×His片段,克隆至慢病毒載體pLenti6.3-MCS-IRES2-EGFP,經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定后,將重組質(zhì)粒與慢病毒輔助包裝元件質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,獲得含U94-6×His基因的重組慢病毒。重組慢病毒感染血管內(nèi)皮細(xì)胞EA.hy926,經(jīng)Blasticidin篩選,RT-PCR和Western blot鑒定,獲得穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株。CCK-8和小管形成實(shí)驗(yàn)研究U94基因?qū)ρ軆?nèi)皮細(xì)胞的增殖及血管生成能力的影響。結(jié)果:成功構(gòu)建含U94基因的慢病毒表達(dá)載體pLenti-U94-IRES2-EGFP,重組慢病毒經(jīng)包裝、純化后測(cè)得滴度為2.35×107TU/ml。重組慢病毒感染血管內(nèi)皮細(xì)胞EA.hy926,獲得能穩(wěn)定表達(dá)U94基因的細(xì)胞株EA.hy926-U94。CCK-8及小管形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示EA.hy926-U94細(xì)胞與陰性對(duì)照細(xì)胞EA.hy926-NC、正常EA.hy926細(xì)胞相比,細(xì)胞增殖活性明顯降低,小管形成能力變差。結(jié)論:成功建立了慢病毒介導(dǎo)的穩(wěn)定表達(dá)U94基因的血管內(nèi)皮細(xì)胞株,研究表明U94可以抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖及血管生成。
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)微生物與免疫學(xué)系;南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科;南京醫(yī)科大學(xué)發(fā)育遺傳學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： 人類皰疹病毒型 慢病毒 U 血管內(nèi)皮細(xì)胞 血管生成
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助(30972784,81273235,81201520)
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 人類皰疹病毒6型(human herpesvirus 6,HHV-6)是一類嗜人淋巴細(xì)胞的雙鏈DNA病毒,于1986年由美國(guó)癌癥中心的Salahuddin等[1]首先從淋巴增生及人類免疫缺陷綜合征(AIDS)患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中分離到,屬于皰疹病毒β亞科。HHV-6原發(fā)感染一般發(fā)生在6個(gè)月～2歲的嬰幼兒,其后在體

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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