本文關(guān)鍵詞：造血干細胞移植建立血小板整合素β3胞內(nèi)段截短體轉(zhuǎn)基因小鼠模型

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【摘要】：本研究通過逆轉(zhuǎn)錄病毒感染整合素β3缺陷小鼠(β3-/-)骨髓造血干細胞再進行骨髓移植建立β3及其胞內(nèi)段不同截短體的轉(zhuǎn)基因小鼠模型,為進一步研究整合素β3胞內(nèi)段在血小板雙向信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的作用提供基礎(chǔ)。將整合素β3野生型、β3-Δ759(缺失R760GT762氨基酸片段)和β3-Δ754(缺失T755NITYRGT762氨基酸片段)的cDNA分別克隆至帶有GFP編碼基因的MSCV MigR1逆轉(zhuǎn)錄病毒載體質(zhì)粒中,用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BOSC23包裝細胞株包裝出帶有β3全長及不同突變體的逆轉(zhuǎn)錄病毒,再感染β3-/-供體小鼠骨髓細胞,尾靜脈注射移植入經(jīng)致死劑量輻照的野生型C57BL/6小鼠體內(nèi),移植后6-8周流式細胞術(shù)檢測GFP和β3的表達率以評估轉(zhuǎn)基因效率。結(jié)果表明,成功建立了空載(Vector)、β3野生型和截短突變β3-Δ759、β3-Δ754等4種小鼠模型,血小板轉(zhuǎn)基因成功的比率(即GFP陽性率)為18%-66%,轉(zhuǎn)基因血小板β3表達可達到β3+/-水平。結(jié)論:利用逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的造血干細胞移植建立血小板轉(zhuǎn)基因小鼠模型是一種高通量快速有效的建立轉(zhuǎn)基因小鼠模型的方法,這為進一步研究整合素β3胞內(nèi)不同區(qū)段對血小板整合素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的影響及體內(nèi)對血小板進行基因操作和基因治療奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院 上海血液學(xué)研究所、醫(yī)學(xué)基因組學(xué)國家重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 血小板整合素β 截短突變 逆轉(zhuǎn)錄病毒 轉(zhuǎn)基因小鼠模型 造血干細胞移植
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目,編號81070414
【分類號】：R-332
【正文快照】： 心腦血管血栓性疾病嚴重影響人類健康,血小板在血栓形成中起著非常重要的作用[1],整合素αIIbβ3(GPIIbIIIa、CD41/CD61)作為血小板表面最豐富的膜糖蛋白,是不同激動劑誘導(dǎo)血小板活化、聚集的最終共同通路,對其阻斷可有效抑制各種激動劑誘導(dǎo)的血小板聚集[2]。血小板整合素αII

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本文編號：880286