本文關(guān)鍵詞：分化誘導劑PMA對THP-1源性巨噬細胞膜表面受體MD-2表達的影響

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【摘要】：目的探索豆蔻酸-佛波醇-乙酸酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)對誘導分化后THP-1細胞膜表面受體髓樣分化蛋白-2(MD-2)表達和分布的影響及其與炎癥因子TNF-α、IL-6分泌的關(guān)系。方法采用PMA梯度劑量(0、1、5、10、50、100 ng/ml)誘導THP-1細胞48 h后觀察貼壁細胞形態(tài)并計算貼壁率;實時熒光定量聚合酶鏈式反應(RT-qPCR)檢測貼壁細胞膜表面受體MD-2、CD14 mRNA相對表達量,ELISA檢測細胞培養(yǎng)上清中分泌性MD-2(sMD-2)、TNF-α和IL-6的分泌水平;進一步通過Western blot檢測貼壁細胞的MD-2蛋白表達、激光掃描共聚焦顯微鏡觀察MD-2在貼壁細胞的分布和定位。結(jié)果梯度PMA劑量(1~100 ng/ml)48 h成功誘導懸浮THP-1細胞貼壁;激光掃描共聚焦顯微鏡觀察顯示PMA誘導后MD-2主要表達于胞膜和胞漿,誘導質(zhì)量濃度增加對MD-2的表達和分布均無顯著影響;RT-qPCR檢測THP-1細胞經(jīng)PMA梯度劑量(1~100 ng/ml)誘導后MD-2和CD14 mRNA相對表達量較誘導前均顯著升高(P0.01),誘導劑量組之間無顯著差異(P0.05);ELISA檢測THP-1細胞經(jīng)PMA梯度劑量(1~100 ng/ml)誘導后,細胞培養(yǎng)上清中的TNF-α、IL-6分泌水平依次顯著增加(P0.01),sMD-2僅誘導前后有明顯統(tǒng)計學差異(P0.01);Western blot檢測顯示梯度劑量PMA誘導后細胞內(nèi)MD-2蛋白表達較誘導前顯著增加,誘導劑量組之間無顯著差異。結(jié)論 1~100 ng/ml PMA均可將THP-1細胞誘導分化為成熟巨噬細胞,增加誘導質(zhì)量濃度可顯著提高炎癥因子TNF-α、IL-6的分泌水平,但對其膜表面受體MD-2表達和分布無明顯影響。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院病理學研究所;
【關(guān)鍵詞】： 巨噬細胞 膜受體 髓樣分化蛋白- 炎癥因子
【基金】：國家自然科學基金(81171848,30700289)
【分類號】：R392.9
【正文快照】： 在創(chuàng)/燒傷及外科重癥感染等引起的內(nèi)毒素血癥與膿毒癥中,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS,也稱內(nèi)毒素)是最重要的致病因子。LPS致病作用的關(guān)鍵在于其通過激活Toll樣受體4(toll like receptor 4,TLR4)跨膜信號通路,活化以單核/巨噬細胞為代表的宿主免疫細胞,促進細胞因子和炎癥

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