本文關(guān)鍵詞：分化誘導(dǎo)劑PMA對THP-1源性巨噬細(xì)胞膜表面受體MD-2表達(dá)的影響

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【摘要】：目的探索豆蔻酸-佛波醇-乙酸酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)對誘導(dǎo)分化后THP-1細(xì)胞膜表面受體髓樣分化蛋白-2(MD-2)表達(dá)和分布的影響及其與炎癥因子TNF-α、IL-6分泌的關(guān)系。方法采用PMA梯度劑量(0、1、5、10、50、100 ng/ml)誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞48 h后觀察貼壁細(xì)胞形態(tài)并計(jì)算貼壁率;實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-qPCR)檢測貼壁細(xì)胞膜表面受體MD-2、CD14 mRNA相對表達(dá)量,ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中分泌性MD-2(sMD-2)、TNF-α和IL-6的分泌水平;進(jìn)一步通過Western blot檢測貼壁細(xì)胞的MD-2蛋白表達(dá)、激光掃描共聚焦顯微鏡觀察MD-2在貼壁細(xì)胞的分布和定位。結(jié)果梯度PMA劑量(1~100 ng/ml)48 h成功誘導(dǎo)懸浮THP-1細(xì)胞貼壁;激光掃描共聚焦顯微鏡觀察顯示PMA誘導(dǎo)后MD-2主要表達(dá)于胞膜和胞漿,誘導(dǎo)質(zhì)量濃度增加對MD-2的表達(dá)和分布均無顯著影響;RT-qPCR檢測THP-1細(xì)胞經(jīng)PMA梯度劑量(1~100 ng/ml)誘導(dǎo)后MD-2和CD14 mRNA相對表達(dá)量較誘導(dǎo)前均顯著升高(P0.01),誘導(dǎo)劑量組之間無顯著差異(P0.05);ELISA檢測THP-1細(xì)胞經(jīng)PMA梯度劑量(1~100 ng/ml)誘導(dǎo)后,細(xì)胞培養(yǎng)上清中的TNF-α、IL-6分泌水平依次顯著增加(P0.01),sMD-2僅誘導(dǎo)前后有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01);Western blot檢測顯示梯度劑量PMA誘導(dǎo)后細(xì)胞內(nèi)MD-2蛋白表達(dá)較誘導(dǎo)前顯著增加,誘導(dǎo)劑量組之間無顯著差異。結(jié)論 1~100 ng/ml PMA均可將THP-1細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成熟巨噬細(xì)胞,增加誘導(dǎo)質(zhì)量濃度可顯著提高炎癥因子TNF-α、IL-6的分泌水平,但對其膜表面受體MD-2表達(dá)和分布無明顯影響。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院病理學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 巨噬細(xì)胞 膜受體 髓樣分化蛋白- 炎癥因子
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81171848,30700289)
【分類號】：R392.9
【正文快照】： 在創(chuàng)/燒傷及外科重癥感染等引起的內(nèi)毒素血癥與膿毒癥中,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS,也稱內(nèi)毒素)是最重要的致病因子。LPS致病作用的關(guān)鍵在于其通過激活Toll樣受體4(toll like receptor 4,TLR4)跨膜信號通路,活化以單核/巨噬細(xì)胞為代表的宿主免疫細(xì)胞,促進(jìn)細(xì)胞因子和炎癥

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本文編號：876298