本文關(guān)鍵詞：針對(duì)干擾素-γ的新型核酸適配體的篩選及鑒定

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【摘要】：目的研發(fā)能特異性結(jié)合干擾素-γ(IFN-γ)的DNA適配體,為發(fā)展IFN-γ的新型檢測(cè)技術(shù)提供基礎(chǔ)。方法體外合成全長(zhǎng)為59個(gè)堿基并含有21個(gè)隨機(jī)寡核苷酸的單鏈DNA文庫(kù),以IFN-γ蛋白為靶標(biāo),利用指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)(SELEX),從單鏈DNA文庫(kù)中篩選能夠選擇性結(jié)合IFN-γ蛋白的核酸適配體;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)富集進(jìn)度、適配體與IFN-γ蛋白結(jié)合特性;MFold軟件預(yù)測(cè)二級(jí)結(jié)構(gòu)。結(jié)果經(jīng)多輪篩選獲得了能夠識(shí)別IFN-γ蛋白的DNA適配體B3-8,其能夠選擇性地結(jié)合IFN-γ蛋白,而與血清白蛋白的結(jié)合較弱。經(jīng)檢測(cè)其Kd值為185 nmol/L。結(jié)論 DNA適配體B3-8能選擇性地識(shí)別IFN-γ蛋白,在研發(fā)針對(duì)IFN-γ的新型檢測(cè)技術(shù)方面具有應(yīng)用潛能。
【作者單位】： 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所;國(guó)家納米科學(xué)中心;南京大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院生命分析化學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 適配體 SELEX IFN-γ
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81071870) 科技部重大科學(xué)計(jì)劃(2011CB933504)
【分類(lèi)號(hào)】：R341
【正文快照】： 核酸適配體(Aptamer)是一類(lèi)經(jīng)篩選得到的能結(jié)合蛋白、細(xì)胞或其他小分子物質(zhì)的單鏈或雙鏈寡核苷酸[1-5],它們自身所形成的空間三維結(jié)構(gòu)能以較高的親和力特異性地與靶分子結(jié)合[6]。另外,核酸適配體還具有易于體外合成、易修飾、免疫原性低、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn),使其成為一類(lèi)較為適

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