本文關(guān)鍵詞：利用滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)快速檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌rpoB基因單堿基突變

  更多相關(guān)文章： 滾環(huán)擴(kuò)增 結(jié)核分枝桿菌 耐藥 rpoB基因

【摘要】：目的應(yīng)用滾環(huán)擴(kuò)增(rolling circle amplification)技術(shù)建立對(duì)結(jié)核分枝桿菌耐藥基因單堿基突變的快速檢測(cè)方法。方法以結(jié)核分枝桿菌利福平耐藥rpoB基因?yàn)檠芯繉?duì)象,設(shè)計(jì)針對(duì)該基因常見(jiàn)突變位點(diǎn)的鎖式探針。通過(guò)對(duì)突變型模板、野生型模板、非結(jié)核分枝桿菌基因序列模板及不同比例的突變型模板和野生型模板混合樣本的檢測(cè),研究本實(shí)驗(yàn)方法的特異性和靈敏度。建立特異性地檢測(cè)rpoB基因單堿基突變的滾環(huán)擴(kuò)增方法。通過(guò)對(duì)臨床樣本的檢測(cè)并與測(cè)序結(jié)果比較,評(píng)價(jià)該方法的臨床應(yīng)用價(jià)值。結(jié)果通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)條件,應(yīng)用滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)能特異性的檢測(cè)出結(jié)核分枝桿菌耐利福平rpoB基因的單堿基突變。通過(guò)對(duì)含有不同比例突變型模板的混合樣本檢測(cè),最低能檢測(cè)出1%突變型/野生型模板的樣本。80株臨床樣本的檢測(cè)與測(cè)序結(jié)果一致。結(jié)論滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)特異性高、靈敏度高,無(wú)需特殊昂貴儀器且簡(jiǎn)單易操作,能夠快速有效的檢測(cè)出耐藥結(jié)核的單堿基突變,是具有臨床應(yīng)用前景的方法。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所檢驗(yàn)科;重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局疾病預(yù)防控制研究室;
【關(guān)鍵詞】： 滾環(huán)擴(kuò)增 結(jié)核分枝桿菌 耐藥 rpoB基因
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81171667) 重慶市科委攻關(guān)課題(CSTC2011AC5033) 國(guó)家質(zhì)檢總局項(xiàng)目(2010IK212) 深港創(chuàng)新圈計(jì)劃聯(lián)合資助項(xiàng)目(ZYB200907090128A) 深圳市科技計(jì)劃(HZ0907004)~~
【分類號(hào)】：R378.911
【正文快照】： 結(jié)核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis)感染引起的結(jié)核病仍是全世界范圍內(nèi)嚴(yán)重危害人民健康的最常見(jiàn)傳染病之一。據(jù)WHO估計(jì),在全世界的結(jié)核病患者中,約3.6%的患者存在耐多藥現(xiàn)象[1],耐藥性結(jié)核菌株的流行導(dǎo)致結(jié)核病疫情日益嚴(yán)峻[2-4]。利福平(rifampin,RFP)是傳統(tǒng)的最主要

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 賈雙榮;張可s，

本文編號(hào)：868680