本文關(guān)鍵詞：NALP3富含亮氨酸重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域識(shí)別人細(xì)胞周期蛋白H和禽冠狀病毒蛋白

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【摘要】：目的:尋找與NALP3富含亮氨酸重復(fù)序列(leucine-rich repeat,LRR)結(jié)構(gòu)域相互作用的蛋白質(zhì)分子。方法:克隆NALP3富含亮氨酸重復(fù)序列(NALP3-LRR)結(jié)構(gòu)域的DNA序列并經(jīng)測序檢驗(yàn)。應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù),構(gòu)建以NALP3-LRR結(jié)構(gòu)域?yàn)檎T餌基因的酵母雙雜交載體,對(duì)人胚肺cDNA文庫進(jìn)行雜交篩選,經(jīng)酵母回交實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證蛋白質(zhì)在酵母細(xì)胞內(nèi)的相互作用并對(duì)陽性克隆的DNA進(jìn)行序列測定和生物信息學(xué)分析。將篩選到的陽性克隆進(jìn)一步用免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證NALP3-LRR結(jié)構(gòu)域與陽性蛋白之間相互作用的可靠性。結(jié)果:成功克隆NALP3-LRR結(jié)構(gòu)域的DNA序列并經(jīng)測序檢驗(yàn)正確。用酵母雙雜交技術(shù)對(duì)人胚肺cDNA文庫進(jìn)行酵母雜交篩選共獲得4個(gè)陽性克隆。免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)能與NALP3-LRR結(jié)構(gòu)域發(fā)生相互作用的陽性蛋白是人細(xì)胞周期蛋白H和禽傳染性支氣管炎病毒株Cal99的ORF1a。結(jié)論:NALP3的富含亮氨酸重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域能與人細(xì)胞周期蛋白H和禽冠狀病毒蛋白發(fā)生相互作用。
【作者單位】： 暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室 國家中醫(yī)藥管理局病理生理學(xué)實(shí)驗(yàn)室;南方醫(yī)科大學(xué)病理生理學(xué)教研室;山西醫(yī)科大學(xué)人體解剖學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： NALP蛋白 富含亮氨酸重復(fù)序列 人細(xì)胞周期蛋白H 禽傳染性支氣管炎病毒 酵母雙雜交系統(tǒng)
【基金】：廣東省高等學(xué)校自然科學(xué)重點(diǎn)研究項(xiàng)目(No.05Z002) 廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.S2012010008161)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 固有免疫(innate immunity)是多細(xì)胞生物抗御病原體感染和抗腫瘤的第一道防線。固有免疫細(xì)胞通過表達(dá)模式識(shí)別受體(pattern-recognition receptors,PRRs)識(shí)別病原體相關(guān)分子模式(pathogen-associatedmolecular patterns,PAMPs),啟動(dòng)機(jī)體的生物防御機(jī)能。Toll樣受體[1](Toll-li

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本文編號(hào)：867008