本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用含內(nèi)參的多重實(shí)時(shí)熒光RT-PCR方法快速檢測(cè)登革病毒和基孔肯雅病毒

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【摘要】：目的建立一種登革病毒、基孔肯雅病毒并含人類基因內(nèi)參檢測(cè)的多重實(shí)時(shí)熒光RT-PCR方法,能在同一反應(yīng)管內(nèi)同時(shí)檢測(cè)目前發(fā)現(xiàn)的所有來(lái)源的登革病毒或基孔肯雅病毒。方法針對(duì)登革病毒3′端非編碼區(qū)和基孔肯雅病毒結(jié)構(gòu)蛋白E2-6K-E1區(qū)以及人體各類組織細(xì)胞中均能穩(wěn)定表達(dá)的RNAse P基因,設(shè)計(jì)了3套特異性引物和探針,建立了1套能同時(shí)檢測(cè)登革病毒、基孔肯雅病毒及含有人類基因檢測(cè)內(nèi)參的多重實(shí)時(shí)熒光RT-PCR方法,對(duì)其靈敏性和特異性進(jìn)行了驗(yàn)證,并對(duì)臨床發(fā)熱病人標(biāo)本進(jìn)行了應(yīng)用評(píng)估。結(jié)果該方法對(duì)檢測(cè)體外轉(zhuǎn)錄合成的登革病毒和基孔肯雅病毒RNA的靈敏性可達(dá)最低每個(gè)反應(yīng)10～100拷貝,對(duì)檢測(cè)登革1型病毒和基孔肯雅病毒的靈敏性分別可達(dá)最低每個(gè)反應(yīng)0.1TCID50/mL和1TCID50/mL。用20株登革病毒、4株基孔肯雅病毒和日本腦炎病毒、西尼羅病毒、黃熱病毒、蓋塔病毒、辛德畢斯病毒各1株進(jìn)行檢測(cè),方法的特異性均為100%。方法應(yīng)用于189份發(fā)熱病人血清標(biāo)本檢測(cè),可準(zhǔn)確地鑒定出其中登革病毒或基孔肯雅病毒核酸陽(yáng)性的標(biāo)本,且所有血清標(biāo)本均能被內(nèi)參引物和探針有效地?cái)U(kuò)增和雜交。結(jié)論本研究建立了一種高靈敏性、高特異性且含人類基因內(nèi)參檢測(cè)的登革病毒和基孔肯雅病毒多重實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)方法,可作為登革熱或基孔肯雅熱病人早期快速鑒別診斷的有效工具,也可用于蚊媒攜帶登革病毒或基孔肯雅病毒的高通量快速篩查。
【作者單位】： 廣東檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心;廣東省疾病預(yù)防控制中心;
【關(guān)鍵詞】： 登革病毒 基孔肯雅病毒 內(nèi)參 多重實(shí)時(shí)熒光RT-PCR
【基金】：質(zhì)檢公益性行業(yè)科研專項(xiàng)基金資助項(xiàng)目(No.201010036)~~
【分類號(hào)】：R373.3
【正文快照】： 登革病毒(dengue virus,DENV)屬黃病毒科黃病毒屬成員,有四種血清型,可通過(guò)蚊類叮咬人而傳播,四種血清型登革病毒均可引起登革熱、登革出血熱甚至登革休克綜合征等不同危害程度的疾病。基孔肯雅病毒(chikungunya virus,CHIKV)屬于披膜病毒科甲病毒屬,可引起人類發(fā)生與登革熱

【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：850361