本文關(guān)鍵詞：人前列腺癌PC-3細(xì)胞的熒光標(biāo)記及其脊椎轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型的建立

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【摘要】：第一部分慢病毒介導(dǎo)的綠色熒光蛋白報(bào)告基因?qū)θ饲傲邢侔㏄C-3細(xì)胞的標(biāo)記 [目的]目前仍沒有合適的方法標(biāo)記人前列腺癌PC-3細(xì)胞,追蹤觀察腫瘤的轉(zhuǎn)移情況。本實(shí)驗(yàn)旨在探討慢病毒介導(dǎo)的綠色熒光蛋白(GFP)標(biāo)記人前列腺癌PC-3細(xì)胞是否影響其細(xì)胞生物學(xué)特性,以及GFP基因能否持久穩(wěn)定表達(dá),為下一步實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。 [方法]常規(guī)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)、傳代,在細(xì)胞狀態(tài)最佳時(shí)以不同病毒感染復(fù)數(shù)(MOI)實(shí)行GFP慢病毒對(duì)PC-3的感染,7天后在熒光顯微鏡下觀察GFP在PC-3的表達(dá)情況。選取感染GFP陽性表達(dá)率最高的孔繼續(xù)培養(yǎng)傳代至第三代后,分別用鏡下形態(tài)觀、MTT測(cè)生長(zhǎng)曲線、劃痕實(shí)驗(yàn)來對(duì)比兩種細(xì)胞的形態(tài)、活性、生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)狀態(tài),以評(píng)價(jià)GFP基因在PC-3細(xì)胞表達(dá)的穩(wěn)定性。 [結(jié)果]置熒光顯微鏡下,轉(zhuǎn)染72h后,部分PC-3細(xì)胞可見綠色熒光,轉(zhuǎn)染一周時(shí),綠色熒光表達(dá)最強(qiáng)。其中以MOI=20感染率最高,GFP陽性表達(dá)率為(92.3±1.2)%,GFP/PC-3在體外持續(xù)培養(yǎng)2、4、8周,GFP陽性率沒有明顯變化。鏡下形態(tài)觀、MTT測(cè)生長(zhǎng)曲線、劃痕實(shí)驗(yàn)等結(jié)果顯示,與轉(zhuǎn)染前相比,慢病毒感染PC-3后,對(duì)細(xì)胞活力、增殖、凋亡和周期均沒有影響(P0.05)。 [結(jié)論]GFP慢病毒能夠高效標(biāo)記PC-3,并且不影響其生物學(xué)特性,GFP基因在PC-3細(xì)胞中能夠持久穩(wěn)定表達(dá),可以用于下一步的細(xì)胞示蹤研究。 第二部分前列腺癌脊椎轉(zhuǎn)移模型的建立 [目的]將轉(zhuǎn)染成功后穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光蛋白的前列腺癌PC-3細(xì)胞(文中稱GFP/PC-3細(xì)胞)采用懸液注射于小鼠的下腔靜脈,建立可在動(dòng)物活體熒光成像系統(tǒng)下直接觀察腫瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移的簡(jiǎn)便、可靠的前列腺癌脊柱轉(zhuǎn)移模型。 [方法]1、3只4周-6周齡的雄性裸鼠,用細(xì)胞濃度為1×107個(gè)/ml的GFP/PC-3細(xì)胞懸液0.15ml行腋窩皮下注射。觀察GFP/PC-3的活性和侵襲力。2、16只4周-6周齡的雄性裸鼠,在手術(shù)顯微鏡下暴露下腔靜脈,用40ul的胰島素注射針頭抽取細(xì)胞濃度為1×107個(gè)/ml的GFP/PC-3細(xì)胞懸液0.15ml行下腔靜脈注射。觀察下腔靜脈注射腫瘤細(xì)胞后裸鼠的存活率及3個(gè)月后腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移情況。 [結(jié)果]1、皮下注射三只裸鼠一周后均可見有成瘤灶并能在活體熒光成像系統(tǒng)下觀察到綠色熒光,兩周后腫瘤生長(zhǎng)迅速,8周后裸鼠呈惡病質(zhì)狀態(tài),12周后死亡。2、下腔靜脈注射裸鼠脊柱轉(zhuǎn)移模型成活率為100%(16/16)；一周時(shí)活體熒光成像系統(tǒng)下可見3只腰背部有綠色熒光顯像,四周時(shí)可見表達(dá)綠色熒光的腫瘤增大,腫瘤骨轉(zhuǎn)移率為19%。(3/16)。3、三個(gè)月后脫頸處死荷瘤鼠,解剖后行大體觀察,可見3只裸鼠腰椎有腫瘤浸潤(rùn),與動(dòng)物活體熒光成像系統(tǒng)結(jié)果一致,轉(zhuǎn)移率約為19%(3/16)。4、病理學(xué)觀察：大體病理：大體解剖發(fā)現(xiàn)腰椎有腫瘤轉(zhuǎn)移,轉(zhuǎn)移腫瘤塊呈灰白色團(tuán)塊狀隆起于腰椎表面。顯微鏡下觀察：皮下種植腫瘤細(xì)胞排列紊亂,形態(tài)不規(guī)則,細(xì)胞分化差,核大深染；椎體轉(zhuǎn)移瘤有反應(yīng)性成骨顯像。 [結(jié)論]用綠色熒光蛋白標(biāo)記的人前列腺癌PC-3細(xì)胞成功的建立了裸鼠脊柱骨轉(zhuǎn)移模型,為進(jìn)一步研究前列腺癌骨轉(zhuǎn)移提供了一種簡(jiǎn)便、可行的新方法,對(duì)前列腺腫瘤治療藥物開發(fā)、腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制的干預(yù)、基因治療等許多與臨床密切聯(lián)系的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究提供了幫助。
【關(guān)鍵詞】：PC-3細(xì)胞 慢病毒屬 綠色熒光蛋白 前列腺癌 PC-3細(xì)胞 骨轉(zhuǎn)移 動(dòng)物模型 活體熒光成像系統(tǒng)
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 中英文~.寫對(duì)照表4-5
• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 前言12-14
• 第一部分 慢病毒介導(dǎo)的綠色熒光蛋白報(bào)告基因?qū)θ饲傲邢侔㏄C-3細(xì)胞的標(biāo)記14-37
• 材料和方法14-26
• 結(jié)果26-30
• 討論30-33
• 參考文獻(xiàn)33-37
• 第二部分 前列腺癌脊椎轉(zhuǎn)移模型的建立37-52
• 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、材料和方法37-41
• 結(jié)果41-44
• 討論44-49
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 綜述52-69
• 參考文獻(xiàn)63-69
• 致謝69-71
• 讀研期間發(fā)表論文71

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：829973