本文關(guān)鍵詞：大鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子C重組腺病毒載體的構(gòu)建及在內(nèi)皮祖細(xì)胞中的表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 血小板衍生生長(zhǎng)因子C pAD/CMV/V-DEST腺病毒載體 內(nèi)皮祖細(xì)胞 轉(zhuǎn)染

【摘要】：目的構(gòu)建含大鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子C(PDGF-C)基因的pAD-EGFP-PDGF-C的重組腺病毒表達(dá)載體,體外轉(zhuǎn)染骨髓源性內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)并觀察目的基因蛋白及mRNA表達(dá)情況。方法通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(RT-PCR)法從pIRES2-EGFP-PDGF-C真核表達(dá)載體中獲得PDGF-C目的片段,經(jīng)BP重組與LR重組插入到pAD/CMV/V5-DEST,構(gòu)建pAD-PDGF-C-IRES2-EGFP腺病毒載體。酶切及DNA測(cè)序鑒定后轉(zhuǎn)染HEK293A包裝、純化,測(cè)定病毒滴度后轉(zhuǎn)染大鼠骨髓源性EPCs,應(yīng)用Real-time qPCR、蛋白免疫印跡法(Western blotting)等方法檢測(cè)PDGF-C蛋白及mRNA的表達(dá)。結(jié)果核酸內(nèi)切酶消化及PCR分析證實(shí)PDGF-C基因成功插入pAD/CMV/V5-DEST腺病毒載體,轉(zhuǎn)染后熒光顯微鏡下觀察可見(jiàn)綠色熒光蛋白表達(dá),轉(zhuǎn)染48h后實(shí)時(shí)定量酵素聚合反應(yīng)技術(shù)(Real-time qPCR)測(cè)定EPCs中PDGF-C含量明顯提高(P0.05),Wester blotting檢測(cè)證實(shí)在46×103存在特異性條帶。結(jié)論成功構(gòu)建了大鼠PDGF-C基因的腺病毒表達(dá)載體pAD-EGFP-PDGF-C,體外轉(zhuǎn)染大鼠骨髓源性EPCs能高效表達(dá)目的基因產(chǎn)物,為后續(xù)研究PDGF-C基因功能以及進(jìn)一步開(kāi)展基因治療奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院血管外科;
【關(guān)鍵詞】： 血小板衍生生長(zhǎng)因子C pAD/CMV/V-DEST腺病毒載體 內(nèi)皮祖細(xì)胞 轉(zhuǎn)染
【基金】：重慶市衛(wèi)生局醫(yī)學(xué)科研基金資助項(xiàng)目(2012-2-053)
【分類號(hào)】：R363
【正文快照】： 血小板衍生生長(zhǎng)因子C(PDGF-C)是由Li等[1]新近發(fā)現(xiàn)的PDGF家族成員,活化形式為同二聚體PDGF-CC,受體為PDGFR-αα和PDGFR-αβ,分子結(jié)構(gòu)中除包含高度保守的PDGF/VEGF同源結(jié)構(gòu)域外,還含有獨(dú)特的CUB結(jié)構(gòu)域[2-3]。本研究旨在以復(fù)制缺陷型腺病毒pAD/CMV/V5-DEST為載體,采用Gateway

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王s，

本文編號(hào)：827833