本文關(guān)鍵詞：HL-60細(xì)胞胞質(zhì)體的制備

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【摘要】：建立懸浮培養(yǎng)細(xì)胞胞質(zhì)體制備及鑒定方法,為細(xì)胞重構(gòu)奠定基礎(chǔ)。采用密度梯度離心法和低速離心法純化人白血病HL-60細(xì)胞,在單獨(dú)細(xì)胞松弛素B(CB)和聯(lián)合秋水酰堿介導(dǎo)下,分別于34℃和25℃,50%Percoll等密度梯度離心對HL-60細(xì)胞進(jìn)行脫核,然后分別用38%和40%Percoll密度梯度離心純化胞質(zhì)體;采用Wright-Giem-sa染色和4,6-聯(lián)脒-2-苯基吲哚二鹽酸鹽(DAPI)/羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯(CFSE)熒光染料雙染色觀察胞質(zhì)體形態(tài)學(xué)變化;采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測胞質(zhì)體表型和線粒體膜電位(MMP)以評價其活性。結(jié)果顯示,CB聯(lián)合秋水酰堿介導(dǎo)HL-60細(xì)胞脫核率為91.98%±4.29%,明顯高于單獨(dú)CB組(74.95%±3.02%)(P0.01);34℃組的脫核率和直徑≥5μm胞質(zhì)體比例均明顯高于25℃組(P0.01,P0.05);38%Percoll密度梯度離心純化胞質(zhì)體純度高于40%Percoll組;純化的HL-60胞質(zhì)體表型無明顯變化,12h內(nèi)其活性達(dá)80%以上。結(jié)果表明,CB聯(lián)合秋水酰堿介導(dǎo)下50%Percoll密度梯度離心脫核、38%Percoll密度梯度離心純化、DAPI/CFSE雙染鑒定、MMP檢測是制備和鑒定懸浮培養(yǎng)細(xì)胞胞質(zhì)體的適宜方案。
【作者單位】： 遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院貴州省細(xì)胞工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 胞質(zhì)體 脫核 HL-細(xì)胞 細(xì)胞松弛素B 秋水酰堿
【基金】：貴州省科技計(jì)劃發(fā)展資助項(xiàng)目(黔科合計(jì)字2051號)
【分類號】：R329
【正文快照】： 引言胞質(zhì)體(Cytoplast)即去核細(xì)胞是研究線粒體DNA、細(xì)胞質(zhì)膜成分及功能、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞分化等很好的生物模型,也是通過細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)替換實(shí)現(xiàn)細(xì)胞重構(gòu)的必備要件。胞質(zhì)體的制備方法分為侵入性脫核和非侵入性脫核兩種[1],前者是采用顯微操作機(jī)械去核,適用于體積較大的細(xì)胞;

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 阮成鈞;馮偉生;馮振卿;顧萍;張化彪;;骨髓間質(zhì)干細(xì)胞的胞質(zhì)體制備及其活性[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2008年43期

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 危敏,馬文麗,毛向明,宋艷斌,張寶,馮春瓊,鄭文嶺;細(xì)胞松弛素B對K562細(xì)胞脫核作用的觀察[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2002年12期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張吉才,繆繼武,楊寧,尹蘭珍;人外周血樹突狀細(xì)胞抗HL-60細(xì)胞活性探討[J];中華血液學(xué)雜志;1996年05期

2 王建安,舒翠玲,賴春寧,沈倍奮;人CD34抗原基因在HL-60細(xì)胞中的轉(zhuǎn)移和表達(dá)[J];中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;1996年04期

3 王小莉,王仲文,楊紹和,張郁,賀俊崎;電離輻射誘發(fā)HL-60細(xì)胞凋亡及Bcl-2基因?qū)?xì)胞凋亡的影響[J];輻射防護(hù);2000年06期

4 王海波,孫振青,周巖冰,張建立,李世寬,牛兆建;人類腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)分化模型的建立[J];青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年01期

5 邵國英 ,吳興中 ,陳淑蓉 ,王振義;維甲酸誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞向粒細(xì)胞分化時蛋白激酶C的作用[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;1989年04期

6 田潔,吳蔚,唐佩弦;HL-60細(xì)胞雙向分化過程中表面膜抗原的變化[J];現(xiàn)代免疫學(xué);1989年06期

7 邱曉彥,侯春梅,沈繼銘,張叔人,唐佩弦,毛寧;HL-60細(xì)胞Ig樣蛋白的表達(dá)及IgH V-D-J序列分析[J];中華血液學(xué)雜志;1999年06期

8 周天紅!100029,曹淑蘭!100029,徐梅!100029,范慕貞!100029;ODC反義寡核苷酸對HL-60細(xì)胞生長特性及其相關(guān)基因表達(dá)的影響[J];中華血液學(xué)雜志;2000年12期

9 崔玉東,稻波修,山盛■,桑原干典;FMLP刺激HL-60細(xì)胞NADPH氧化酶激活的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑[J];免疫學(xué)雜志;2001年05期

10 黃功華,梁景耀,劉新光,梁念慈;酵母細(xì)胞中構(gòu)建HL-60細(xì)胞的酵母雙雜交cDNA文庫[J];廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2004年01期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 周竹娟;轉(zhuǎn)核技術(shù)建立可增殖神經(jīng)細(xì)胞系的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

2 竺可青;低濃度烷化劑MNNG對MAPK信號通路的作用[D];浙江大學(xué);2003年

3 潘勇;原子力顯微鏡在人工磷脂雙分子層、膜蛋白和成纖維細(xì)胞的應(yīng)用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

4 林金秀;MIM,腫瘤轉(zhuǎn)移消失蛋白，，促進(jìn)Cortactin但抑制N-WASP介導(dǎo)的肌動蛋白聚合[D];福建醫(yī)科大學(xué);2004年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 危敏;應(yīng)用DNA芯片技術(shù)研究細(xì)胞松弛素B誘導(dǎo)K562細(xì)胞脫核的分子機(jī)制[D];中國人民解放軍第一軍醫(yī)大學(xué);2003年

2 郁心;人LIF基因的克隆、表達(dá)及功能研究[D];蘇州大學(xué);2006年

3 蔣佩;膽固醇流出對ox-LDL誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡的影響[D];南華大學(xué);2005年

本文編號：813973