本文關鍵詞：弓形蟲pET28a-SAG1和pET28a-SAG4重組基因的構建、表達及其免疫保護作用

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【摘要】：目的構建弓形蟲pET28a-SAG1和pET28a-SAG4重組基因并原核細胞表達弓形蟲pET28a-SAG1和pET28a-SAG4重組蛋白；并以此免疫動物來評價pET28a-SAG1和pET28a-SAG4重組蛋白的免疫效果。為弓形蟲病的基因疫苗應用提供科學依據(jù)。方法根據(jù)GenBank發(fā)表的RH株弓形蟲SAG1和SAG4序列設計合成2對特異性引物,提取弓形蟲基因組DNA,以其為模板,PCR擴增這2個抗原基因,并構建到pMD19(Simple)克隆載體上,經菌落PCR、雙酶切鑒定并測序正確后,再將酶切產物純化好的SAG1和SAG4基因構建到pET28a原核表達系統(tǒng)中,并在BL21大腸埃希菌中表達；鑒定并純化重組蛋白,免疫小鼠,取血清,應用間接ELISA法檢測小鼠血清中抗弓形蟲抗體IgG,并通過攻蟲試驗來觀察小鼠的發(fā)病及死亡情況以評價這2個重組蛋白的免疫保護作用。結果成功獲取SAG1與SAG4基因,并且將這2個基因構建到了pMD19 (Simple)載體和原核表達質粒pET28 a載體上,成功獲得pET28a-SAG4和pET28a-SAG1。原核表達后分別獲取到SAG4和SAG1目的重組蛋白。應用純化的重組蛋白免疫小鼠后各組小鼠血清OD值差異有統(tǒng)計學意義(p0.01),雙蛋白免疫組的血清OD值升的最高；攻擊實驗時,雙蛋白免疫組存活時間最長,pET28a-SAG1組存活時間比p ET28a-SAG4組長,差異有統(tǒng)計學意義(p0.01)。結論1.成功構建pET28a-SAG1和pET28a-SAG4重組基因并表達和純化出目的重組蛋白。2.國內首次用昆明小鼠做弓形蟲的攻蟲實驗,證明昆明小鼠對弓形蟲易感。3.攻蟲實驗表明雙蛋白免疫組小鼠存活時間長于單蛋白免疫的存活時間,pET28a-SAG1組小鼠存活時間長于pET28a-SAG4組。pET28a-SAG1蛋白的免疫保護作用比pET28a-SAG4蛋白好。4.這兩個基因所表達的蛋白質皆有免疫保護作用。
【關鍵詞】：弓形蟲 SAG1 SAG4 pET28a 免疫保護性
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R392
【目錄】：

• 個人簡歷3-6
• 英文縮略詞匯表6-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-15
• 第一章 弓形蟲pET28a-SAG1和pET28a-SAG4基因的構建及鑒定15-51
• 1. 實驗材料15-20
• 2. 實驗方法20-33
• 3. 實驗結果33-47
• 4. 討論47-51
• 第二章 弓形蟲pET28a-SAG1和pET28a-SAG4蛋白的原核表達51-68
• 1. 實驗材料51-54
• 2. 實驗方法54-60
• 3. 實驗結果60-66
• 4. 討論66-68
• 第三章 弓形蟲pET28a-SAG1和pET28a-SAG4所表達的蛋白疫苗的動物免疫保護性作用68-79
• 1. 實驗材料68-69
• 2. 實驗方法69-72
• 3. 實驗結果72-77
• 4. 討論77-79
• 結論79-80
• 參考文獻80-83
• 附錄83-92
• 綜述92-101
• 參考文獻96-101
• 致謝101-102
• 碩士期間發(fā)表的論文102

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