本文關(guān)鍵詞：肺炎克雷伯菌轉(zhuǎn)錄調(diào)控子CRP對(duì)allS的調(diào)控研究

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【摘要】：目的探究肺炎克雷伯菌cAMP受體蛋白(cAMP receptor protein,CRP)對(duì)基因allS的調(diào)控關(guān)系及機(jī)制。方法首先,PCR擴(kuò)增allS的啟動(dòng)子區(qū)序列,擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化,酶切連接入placZ15質(zhì)粒,構(gòu)建得到重組質(zhì)粒,將重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入肺炎克雷伯菌CCW01(缺失lacZ基因)和CCW01:△crp(缺失crp基因)中。通過(guò)測(cè)定CCW01和CCW01:△crp的β-半乳糖苷酶活性,并用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析數(shù)值結(jié)果,確定調(diào)控子CRP對(duì)allS基因的調(diào)控關(guān)系。運(yùn)用RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄肺炎克雷伯野生株和突變株△crp RNA為cDNA后比較all S基因在野生株和突變株△crp中的表達(dá)量來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證CRP對(duì)allS的調(diào)控關(guān)系。表達(dá)純化出有活性的His-CRP蛋白,然后經(jīng)PCR擴(kuò)增allS啟動(dòng)子區(qū)的DNA序列,通過(guò)凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)確定CRP是否能結(jié)合到all S的啟動(dòng)子區(qū),通過(guò)應(yīng)用DNaseⅠ足跡實(shí)驗(yàn)鑒定CRP在allS啟動(dòng)子區(qū)的具體結(jié)合位點(diǎn)。結(jié)果lacZ報(bào)告基因融合實(shí)驗(yàn)顯示CRP對(duì)allS具有正調(diào)控作用。實(shí)時(shí)定量RT-PCR顯示突變株△crp中allS基因表達(dá)量明顯低于野生株,進(jìn)而驗(yàn)證了LacZ報(bào)告基因融合實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果的正確性。凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)和DNaseⅠ足跡實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步表明CRP能直接結(jié)合到allS啟動(dòng)子區(qū)的-94到-60之間的堿基序列上(轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)為+1)。結(jié)論CRP調(diào)控子可以結(jié)合到allS的啟動(dòng)子區(qū)并促進(jìn)allS基因的轉(zhuǎn)錄。本研究首次探索了肺炎克雷伯菌轉(zhuǎn)錄調(diào)控子CRP對(duì)allS的調(diào)控機(jī)制,為進(jìn)一步研究肺炎克雷伯菌CRP的轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)及基因allS在肺炎克雷伯菌中的作用奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：肺炎克雷伯菌 CRP 轉(zhuǎn)錄調(diào)控 allS
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R378
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 1 材料11-15
• 2 方法15-29
• 3 結(jié)果29-36
• 4 討論36-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 文獻(xiàn)綜述43-49
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 致謝49-50
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果及發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄50

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 黃忠強(qiáng);肺炎克雷伯菌的藥敏結(jié)果分析[J];廣西預(yù)防醫(yī)學(xué);2001年04期

2 萬(wàn)珊;費(fèi)櫻;楊煥婕;劉寶;;1051株臨床肺炎克雷伯菌的藥敏分析[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2011年20期

3 雷德龍,沈源;134株肺炎克雷伯菌的分離與藥敏分析[J];上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志;1997年04期

4 葉楊芹,馬佳毓,付英梅,張文莉,趙月輝;脈沖凝膠電泳技術(shù)在肺炎克雷伯菌分型中的應(yīng)用[J];中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2002年04期

5 盛清;社區(qū)獲得性肺炎克雷伯菌菌血癥:臨床類(lèi)型的全球性差異[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(流行病學(xué)傳染病學(xué)分冊(cè));2002年03期

6 諸葛石養(yǎng),鐘毓娟,林慧,蒙保山,韋維;98例肺炎克雷伯菌的臨床分布及藥敏分析[J];右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年01期

7 梁元吉;;老年下呼吸道感染患者肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌耐藥性分析[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)文摘.內(nèi)科學(xué);2003年06期

8 熊一平,余顯書(shū),曹何,胥飚;147株肺炎克雷伯菌引起醫(yī)院感染調(diào)查和藥敏結(jié)果分析[J];重慶醫(yī)學(xué);2004年02期

9 褚斌斌,楊珊明,鄔碩平,張素惠;188株肺炎克雷伯菌的抗菌藥物敏感試驗(yàn)分析[J];現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué);2005年08期

10 唐惠君;;肺炎克雷伯菌的藥敏解析[J];職業(yè)與健康;2006年05期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 萬(wàn)珊;費(fèi)櫻;楊煥婕;劉寶;;1051株臨床肺炎克雷伯菌藥敏分析[A];中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)第十八屆全國(guó)醫(yī)院感染管理學(xué)術(shù)年會(huì)論文資料匯編[C];2011年

2 王德春;王瑞蓮;;196株肺炎克雷伯菌藥敏分析[A];第十屆全軍檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

3 劉玲瓏;毛文祥;丁汀;;臨床分離肺炎克雷伯菌體外耐藥的動(dòng)態(tài)觀察[A];應(yīng)對(duì)突發(fā)公共衛(wèi)生事件論壇論文集[C];2005年

4 廖維維;呂火祥;胡慶豐;沈蓓瓊;袁武鋒;;尿液中分離出菌落形態(tài)完全變異的肺炎克雷伯菌[A];2008年浙江省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

5 陳建江;陳國(guó)英;;住院患者分離的肺炎克雷伯菌耐藥性和流行狀況分析[A];2011年浙江省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2011年

6 馬峻;樊毅;江麗萍;詹學(xué)峰;;肺結(jié)核患者感染肺炎克雷伯菌藥敏分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

7 程科萍;王少康;孔慶芳;孔璐;孫桂菊;張徐軍;;新生兒重癥監(jiān)護(hù)病房4例肺炎克雷伯菌感染暴發(fā)分析[A];中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)第十八屆全國(guó)醫(yī)院感染管理學(xué)術(shù)年會(huì)論文資料匯編[C];2011年

8 陳敏;朱張國(guó);沈先麗;;76株肺炎克雷伯菌感染及耐藥性的分析[A];貴州省醫(yī)學(xué)會(huì)重癥醫(yī)學(xué)分會(huì)第三屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

9 陳亞紅;姚婉貞;周慶濤;劉振英;張曉偉;;產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶大腸桿菌和肺炎克雷伯菌的耐藥性變化[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)呼吸病學(xué)術(shù)會(huì)議暨學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2006年

10 華杰;李艷霞;;肺炎克雷伯菌耐藥性監(jiān)測(cè)[A];2006中國(guó)微生物學(xué)會(huì)第九次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2006年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 徐珍　編譯;超級(jí)病菌橫掃歐洲[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2012年

2 陶慶春;用病原學(xué)檢測(cè)指導(dǎo)抗生素使用[N];健康報(bào);2005年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 賀子龍;醫(yī)院獲得性及社區(qū)獲得性肺炎克雷伯菌的比較基因組學(xué)研究[D];中國(guó)科學(xué)院北京基因組研究所;2016年

2 朱衛(wèi)民;肺炎克雷伯菌β—內(nèi)酰胺酶耐藥機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2002年

3 姚芬;肺炎克雷伯菌和假單胞菌耐藥機(jī)制研究[D];汕頭大學(xué);2007年

4 魏澤慶;產(chǎn)KPC酶肺炎克雷伯菌分子流行和質(zhì)粒介導(dǎo)的KPC酶?jìng)鞑C(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2013年

5 楊繼勇;產(chǎn)KPC肺炎克雷伯菌分子流行病學(xué)與分子特征研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2013年

6 齊艷;產(chǎn)KPC型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌分子分型及傳播機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2012年

7 王京;引起肝膿腫的肺炎克雷伯菌毒力基因分析與分子流行特征研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2013年

8 賈艷;豬源肺炎克雷伯菌菌毛致病的分子基礎(chǔ)及其免疫相關(guān)抗原表位的篩選[D];吉林大學(xué);2007年

9 趙麗娜;基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌氟喹諾酮耐藥分子流行及遺傳特征研究[D];浙江大學(xué);2015年

10 李君杰;產(chǎn)KPC酶肺炎克雷伯菌對(duì)磷霉素耐藥及傳播機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊永清;蘭州地區(qū)臨床分離大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs的基因型及耐藥性研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

2 胡陽(yáng)敏;住院患者抗菌藥物使用與肺炎克雷伯菌耐藥的相關(guān)性以及ICU患者CRKP感染的高危因素分析[D];浙江大學(xué);2015年

3 王云;呼吸道合胞病毒合并肺炎克雷伯菌感染所致肺炎與TLR4-NF-κB信號(hào)通路關(guān)系的初步研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

4 楊碩;宰殺肉雞中肺炎克雷伯菌耐藥基因的檢測(cè)和傳播分析[D];山東大學(xué);2015年

5 譚斌;肺炎克雷伯菌突變株Δcrp的毒力表型分析及調(diào)控子CRP對(duì)基因KP1_4563的調(diào)控[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

6 黃婭鈴;耐碳青酶烯類(lèi)肺炎克雷伯菌產(chǎn)酶耐藥機(jī)制及同源性分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

7 蒲姝麗;碳青霉烯非敏感肺炎克雷伯菌耐藥機(jī)制及分子流行病學(xué)初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

8 陳銘;家兔4種具有相似呼吸道病變疾病的多重PCR檢測(cè)方法建立[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

9 李玲霞;肺炎克雷伯菌的臨床分離及耐藥性分析[D];吉林大學(xué);2016年

10 鐘雪珊;健康人、腹瀉兒童與鼠形動(dòng)物腸道肺炎克雷伯菌的病原學(xué)特征和耐藥性分析[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

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