本文關鍵詞：IFITM2的克隆表達及其抗病毒作用初探

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【摘要】：目的:構建含有ifitm2基因的重組質粒,在人胚腎HEK293T細胞中表達,并驗證IFITM2蛋白的抗病毒作用。方法:參照Genbank ifitm2基因序列,設計上下游引物,通過RT-PCR技術擴增ifitm2基因,并將擴增產物連接至pMD18-T-sim-ple載體上,目的基因測序正確后進一步亞克隆至真核表達載體pVAX1上,轉染HEK293T細胞,通過RT-PCR,蛋白免疫印跡(Western blot)和激光共聚集顯微鏡(LCSM)驗證外源基因在細胞內的表達情況。同時HEK293T細胞過表達IFITM2蛋白,利用含有EGFP基因的VSV-G假膜病毒感染細胞,通過Western blot檢測IFITM2蛋白對病毒的抑制作用。結果:成功獲得ifitm2基因,測序正確,將其連接到pVAX1載體中,經酶切鑒定,證明含有ifitm2基因的重組質粒構建成功,Western blot和LCSM分析表明,目的基因能夠在HEK293T細胞中表達,且呈廣泛分布。過表達IFITM2蛋白后,熒光蛋白分析表明,該蛋白對病毒感染具有一定的抑制作用。結論:成功構建了含有ifitm2基因的重組真核表達質粒,該質�？梢栽谡婧思毎械玫接行П磉_,且對VSV-G假膜病毒具有一定抑制作用,該研究為進一步探討IFITM2蛋白的抗病毒作用及其分子機制提供了實驗及理論基礎。
【作者單位】： 吉林農業(yè)大學動物科技學院;軍事醫(yī)學科學院軍事獸醫(yī)研究所 省部共建人獸共患病預防與控制重點實驗室;
【關鍵詞】： IFITM 克隆表達 抗病毒作用
【基金】：973計劃前期研究專項課題( No.2011CB512110) 中國博士后科學基金面上項目( No.20110491803、No.2012T50859)
【分類號】：R392
【正文快照】： 干擾素誘導的跨膜蛋白(Interferon inducedtransmembrane proteins,IFITMs)是在干擾素刺激后產生的一組蛋白,其家族成員包括4個序列高度相關的膜表面蛋白,即IFITM1、IFITM2、IFITM3和IF-ITM5,它們均在細胞生長的不同階段發(fā)揮一定的生物學功能[1,2],Friedman等[3]在1984年首先

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前1條

1 朱娜;李昌;郭焱;李沂;孫丹丹;任靜強;杜壽文;秦艷青;王茂鵬;田宇飛;金寧一;;IFITM3基因的克隆及其在真核細胞中的表達與定位研究[J];中國免疫學雜志;2012年11期

【共引文獻】

中國碩士學位論文全文數據庫 前1條

1 李沂;IFITM1\2\3的克隆表達及其抗病毒作用研究[D];吉林農業(yè)大學;2013年

【相似文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

1 楊雯;萬孝玲;田春林;王衛(wèi)群;劉曉泉;;弓形蟲表面抗原SAG4基因的克隆、表達和鑒定[J];中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志;2009年04期

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本文編號：805787