本文關(guān)鍵詞：截短ALT1蛋白的獲得及其多克隆抗體的制備

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【摘要】：目的原核表達(dá)、純化截短ALT1蛋白,制備ALT1多克隆抗體。方法利用pCold TF載體原核表達(dá)系統(tǒng),IPTG誘導(dǎo),表達(dá)經(jīng)生物信息學(xué)分析含有兩個(gè)編碼ALT1抗原表位的ALT1 N端1～115個(gè)氨基酸序列的基因片段,依次經(jīng)鎳(Ni)離子親和柱純化、HRV 3C蛋白酶酶切、二次鎳離子親和柱純化和分子篩柱層析得到不帶標(biāo)簽的截短ALT1純蛋白,用純蛋白免疫新西蘭大白兔制備多克隆抗體。結(jié)果經(jīng)測(cè)序證實(shí),成功構(gòu)建了截短pCold TF-ALT1表達(dá)載體。獲得純度達(dá)90%的不帶標(biāo)簽的截短ALT1重組蛋白,制備了效價(jià)達(dá)4.0×106的ALT1多克隆抗體,經(jīng)Western blot鑒定,能特異性地識(shí)別ALT1抗原和肝細(xì)胞裂解液。結(jié)論成功獲得高質(zhì)量的截短ALT1無標(biāo)簽蛋白及其特異的多克隆抗體,為ALT1的免疫學(xué)檢測(cè)試劑的研發(fā)提供了依據(jù)。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;河南省人民醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科;遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院輸血科;
【關(guān)鍵詞】： ALT 原核表達(dá) 蛋白純化 多克隆抗體
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31270984)
【分類號(hào)】：R392.1
【正文快照】： 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)是一種以磷酸吡哆醛為輔基的酶,其在體內(nèi)可逆地催化L-丙氨酸和α-戊二酸轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)-谷氨酸和L-丙酮酸,通過調(diào)節(jié)這4類物質(zhì)的量而在糖與氨基酸的相互轉(zhuǎn)化過程中發(fā)揮重要作用。由于ALT在肝臟中的含量較血清中高1 000倍以上,因此肝臟

【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：804055