本文關(guān)鍵詞：家蠅Defensin基因原核表達(dá)條件的優(yōu)化及其抑菌活性

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【摘要】：目的優(yōu)化家蠅Defensin基因原核表達(dá)條件,并初步研究其抑菌活性。方法 Defensin基因成熟肽被克隆入pGEX-4T-1原核表達(dá)載體中,構(gòu)建重組質(zhì)粒pGEX-4T-1/Defensin,并轉(zhuǎn)化宿主菌后誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)過(guò)程中對(duì)菌液起始濃度、IPTG濃度、誘導(dǎo)溫度和時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化。采用親和層析法分離純化融合蛋白,SDS-PAGE鑒定目的蛋白的表達(dá)情況和分子量。用凝血酶切除谷胱甘肽標(biāo)簽,并通過(guò)體外抑菌實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其抗菌活性。結(jié)果成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pGEX-4T-1/Defensin,目的基因能夠在大腸埃希菌內(nèi)高效表達(dá),分子量為4 kD,與預(yù)期值一致,表達(dá)量約達(dá)40%。抑菌實(shí)驗(yàn)顯示其對(duì)大腸埃希菌K12D31生長(zhǎng)有一定的抑制作用。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)為家蠅Defensin基因功能的深入研究奠定了工作基礎(chǔ)。
【作者單位】： 廣東醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)暨臨床寄生蟲檢驗(yàn)學(xué)教研室;廣東省生物活性藥物研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 抗菌肽 表達(dá) 活性 Defensin
【分類號(hào)】：R384
【正文快照】： 昆蟲防御素(Defensin)是一類堿性小分子多肽,具有熱穩(wěn)定性強(qiáng)、誘導(dǎo)源的非專一性和抗菌譜廣等特點(diǎn),有望開發(fā)成一類新型的多肽抗生素[1-2]。由于其在組織中含量低,分離獲得大量的天然產(chǎn)物很困難,而人工合成多肽的成本高,限制了其應(yīng)用前景。因此,利用基因重組技術(shù)克隆表達(dá)基因是

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1 陸海榮;李國(guó)棟;吳宏宇;黃晉江;汪世龍;黃青山;;抗菌肽GK1在大腸桿菌中的融合表達(dá)[J];生物工程學(xué)報(bào);2008年01期

2 陳琛;;微生物源抗菌肽研究概況[J];生物技術(shù)通報(bào);2010年07期

3 陳琛;吳三橋;李新生;張小鶯;閆茂倉(cāng);;抗菌肽SMAP-29結(jié)構(gòu)功能及分子設(shè)計(jì)策略[J];生物工程學(xué)報(bào);2011年06期

4 王云起,劉飛鵬,李月琴,張欣,蔡繼業(yè);天蠶素A-蜂毒素雜合肽用pBV220載體的表達(dá)、純化和活性測(cè)定[J];中國(guó)生物工程雜志;2005年10期

5 劉先俊;劉方欣;黎波;周輝云;王琴琴;;胸腺素α1與復(fù)合α干擾素融合蛋白的表達(dá)及其生物學(xué)活性[J];生物工程學(xué)報(bào);2008年07期

6 王桂玲;王孝會(huì);都田趙;陳薇;姜佩家;;原核表達(dá)載體GST-RUNX3的構(gòu)建及其在大腸桿菌表達(dá)[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2011年04期

7 韓新燕,汪以真,許梓榮;哺乳動(dòng)物抗菌肽的研究進(jìn)展[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2002年02期

8 汪小福;劉仁虎;陳笑蕓;高智謀;陳錦清;;抗菌肽Thanatin基因表達(dá)載體構(gòu)建與表達(dá)[J];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2007年04期

9 郭佳音;趙曉宇;馮興軍;;抗菌肽及其重組表達(dá)系統(tǒng)研究進(jìn)展[J];生物技術(shù);2010年03期

10 宮霞,樂(lè)國(guó)偉,施用暉;昆蟲抗菌肽及其基因工程研究進(jìn)展[J];遺傳;2002年05期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 明雙喜;王沂蒙;劉艷;江國(guó)托;;抗菌肽作用機(jī)理及其在生產(chǎn)方面的研究進(jìn)展[A];格萊姆抗菌肽——抗菌肽開發(fā)與應(yīng)用技術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

2 彭兵;張樹斌;王立安;;枯草芽孢桿菌菌株A抗菌肽的分離純化及抗真菌機(jī)理[A];格萊姆抗菌肽——抗菌肽開發(fā)與應(yīng)用技術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

3 王沛珍;顧金保;彭鴻娟;;原核表達(dá)的抗菌肽thanatin抑制革蘭氏陽(yáng)性及陰性菌的生長(zhǎng)[A];格萊姆抗菌肽——抗菌肽開發(fā)與應(yīng)用技術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

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5 李娜;孟碩;王鳳山;;抗菌肽Oncorhync inⅡ的克隆及其在酵母中的表達(dá)[A];格萊姆抗菌肽——抗菌肽開發(fā)與應(yīng)用技術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

6 趙瑞君;劉顏崗;程t熛，

本文編號(hào)：797902