本文關鍵詞：HGF及G-CSF誘導大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞分化為肝樣細胞

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【摘要】：背景與目的：目前慢性肝病的患者眾多，若未加干預，很多慢性肝病會發(fā)展為終末期肝病，一旦發(fā)展為終末期肝病，常規(guī)的治療效果不理想，唯一療效確切的是原位肝移植（Orthotopic livertransplantation,OLT），術(shù)后生存率一年為85%~90%，三年生存率75%~80%，但原位肝移植存在肝源不足，而且費用昂貴，以及移植后的免疫排斥反應等因素制約了它的發(fā)展，尋找一種新的方法治療終末期肝病顯得特別的重要。關于骨髓間充質(zhì)干細胞（Bone marrowmesenchymal stem cells，BM-MSCs）方面的研究成為了近年來干細胞研究的熱點，在一定的條件下BM-MSCs可以向骨細胞、成骨細胞、脂肪細胞、肝細胞、神經(jīng)元細胞等分化。BM-MSCs存在于骨髓中，取材方便，容易培養(yǎng)，生長旺盛，免疫原性低，不存在倫理問題，是理想的干細胞移植的種子細胞。另外，國內(nèi)外大量的文獻報道肝細胞生長因子（Hepatocyte growth factor，HGF）被廣泛用于肝相關干細胞體外誘導分化的實驗研究，可調(diào)控BM-MSCs分化為肝細胞。粒細胞集落刺激因子（granlocyte-colony stimulating factor，G-CSF)是一個大小為20-Ku的糖蛋白，有文獻報道G-CSF體外培養(yǎng)BM-MSCs通過ILISA檢測到HGF水平，還有報道培養(yǎng)液中加入了G-CSF能提高BM-MSCs活性。本實驗的目的是探討HGF以及G-CSF可否誘導大鼠BM-MSCs分化為肝樣細胞，為干細胞的研究提供更有效的誘導方案。 方法：以貼壁法分離、培養(yǎng)大鼠BM-MSCs,流式細胞術(shù)鑒定表面標志。實驗分為：對照組（10%FBS)，0.1μmG-CSF干預組,20ng/mLHGF干預組，HGF聯(lián)合G-CSF共同干預組(0.1μmG-CSF+20ng/mLHGF)，誘導后第7天、14天和21天提取細胞總RNA以及總蛋白后進行RT-PCR和Western blot檢測白蛋白（ALB）和甲胎蛋白（AFP）基因mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白水平。 結(jié)果：20ng/mLHGF干預組和HGF聯(lián)合G-CSF共同干預組P3代BM-MSCs誘導后細胞形態(tài)似肝樣細胞。BM-MSCs表面標志物：CD34-PE0.3%,CD45-FITC0.1%,CD90-FITC99.6%,CD105-PE99.8%。20ng/mLHGF干預組和HGF聯(lián)合G-CSF共同干預組檢測到白蛋白（ALB）和甲胎蛋白（AFP）基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平及蛋白水平表達。在第7天、14天、21天，隨時間增加ALB表達量遞增、而AFP表達量遞減，，且同一時間兩組表達量均有差異（P0.05）。 結(jié)論：（1）HGF能誘導大鼠BM-MSCs分化為肝樣細胞。（2）G-CSF對HGF誘導大鼠BM-MSCs分化為肝樣細胞有協(xié)同作用。
【關鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細胞 肝細胞生長因子 粒細胞集落刺激因子 肝樣細胞
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R575.3
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 第一章 大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的分離、培養(yǎng)和流式細胞鑒定13-18
• 1 材料13-14
• 2 方法14-15
• 3 結(jié)果15-16
• 4 討論16-18
• 第二章 大鼠BM-MSCs體外分組及誘導18-20
• 1 材料18
• 2 方法18-19
• 3 結(jié)果19
• 4 討論19-20
• 第三章 大鼠BM-MSCs向肝樣細胞分化20-32
• 1 材料20-21
• 2 方法21-25
• 3 結(jié)果25-30
• 4 討論30-32
• 全文結(jié)論32-33
• 參考文獻33-35
• 附圖35-36
• 文獻綜述36-45
• 參考文獻42-45
• 致謝45-46
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文46-47

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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本文編號：797079