本文關(guān)鍵詞：十二指腸鉤蟲熱休克蛋白HSP60基因的克隆及重組表達(dá)

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【摘要】：目的克隆十二指腸鉤蟲(Ancylostoma duodenale)熱休克蛋白60(heat shock protein 60,HSP60)基因,并在大腸埃希菌中表達(dá)獲得重組AduHSP60蛋白。方法以十二腸鉤蟲成蟲cDNA為模板,PCR擴(kuò)增AduHSP60基因。將獲得的目的基因編碼序列連接至原核表達(dá)載體pETHF,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pETHF/AduHSP60。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)、Ni-NTA親和層析分離純化重組蛋白,SDS-PAGE分析重組蛋白的表達(dá)及純化情況。結(jié)果成功擴(kuò)增到AduHSP60全長編碼序列,編碼序列長度為1 701bp,編碼566個氨基酸。構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒pETHF/AduHSP60,經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)、分離純化獲得了分子質(zhì)量單位為60ku的可溶性重組AduHSP60蛋白。結(jié)論本研究從十二指腸鉤蟲中分離獲得了HSP60基因,構(gòu)建的pETHF/AduHSP60重組質(zhì)粒能在大腸埃希菌中表達(dá)重組蛋白,為進(jìn)一步研究AduHSP60的生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 廣東醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)暨臨床寄生蟲檢驗(yàn)學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 十二指腸鉤蟲 熱休克蛋白 克隆 原核表達(dá)
【分類號】：R383.13
【正文快照】： 熱休克蛋白是生物體在不利環(huán)境因素(如高溫、缺氧、病原入侵、重金屬污染和饑餓等)刺激下應(yīng)激合成的一組特殊的蛋白質(zhì)[1]。根據(jù)同源程度及分子質(zhì)量大小,熱休克蛋白可分為HSP110、HSP90、HSP70、HSP60及小HSP家族,其中HSP60是HSPs家族中一個大的家族。HSP60是近10年來研究與免

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：794432