本文關(guān)鍵詞：剛地弓形蟲RH株ROP11基因的克隆與真核表達(dá)載體的構(gòu)建

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【摘要】：目的構(gòu)建剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)棒狀體蛋白11(ROP11)的真核表達(dá)重組質(zhì)粒并在真核細(xì)胞中表達(dá)目的蛋白。方法設(shè)計(jì)合成弓形蟲ROP11基因引物,運(yùn)用RT-PCR方法擴(kuò)增ROP11基因并克隆至真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(+),構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-ROP11。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞,采用間接免疫熒光法檢測(cè)目的蛋白表達(dá)。結(jié)果 RT-PCR擴(kuò)增弓形蟲ROP11基因片段為1 548bp,與預(yù)期大小相符。構(gòu)建的重組質(zhì)粒pcDNA3.1-ROP11經(jīng)PCR及EcoRⅠ和NotⅠ雙酶切鑒定正確。重組質(zhì)粒測(cè)序后與GenBank報(bào)道的ROP11基因比對(duì),核苷酸序列同源性和推導(dǎo)氨基酸序列同源性均為99%。免疫熒光檢測(cè)顯示,在重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的HeLa細(xì)胞胞漿觀察到黃綠色熒光,對(duì)照組無(wú)熒光。結(jié)論成功構(gòu)建了真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-ROP11,該重組質(zhì)粒能夠在真核細(xì)胞中表達(dá)目的蛋白,為弓形蟲核酸疫苗的研制奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 河北北方學(xué)院病原生物與免疫學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 剛地弓形蟲 ROP 真核表達(dá)質(zhì)粒
【基金】：河北省高等學(xué)校科學(xué)技術(shù)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(No.ZH2012010)
【分類號(hào)】：R382.5
【正文快照】： 剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲,能感染世界上所有的恒溫哺乳動(dòng)物和鳥類[1]。當(dāng)中間宿主,如鳥類,嚙齒類動(dòng)物,反芻動(dòng)物和人食入卵囊或生的、未熟的含有組織包囊的肉類時(shí)可引起感染。飲用含有剛地弓形蟲的水是引起急性弓形蟲病最主要的原因[2,3]。人感

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10 孔t，

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