本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)化生長因子β信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的生物傳感器的構(gòu)建

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【摘要】：為構(gòu)建轉(zhuǎn)化生長因子β信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的下游蛋白Smad3的生物傳感器,根據(jù)已發(fā)表的人類Smad3基因序列設(shè)計(jì)引物,利用PCR擴(kuò)增得到了一個(gè)長度約為1.3 kb的Smad3基因全長序列.序列分析結(jié)果表明與數(shù)據(jù)庫公布的人類序列(Genebank登錄號:NM_005902.3)一致.通過基因工程的方法,構(gòu)建含有增強(qiáng)的青色熒光蛋白-Smad3-黃色熒光蛋白變體(ECFP-Smad3-Citrine)融合蛋白的真核表達(dá)載體即:Smad3生物傳感器.轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞并觀察轉(zhuǎn)染效率和融合蛋白表達(dá)情況.在熒光顯微鏡下,應(yīng)用MetaFlour FRET 4.6軟件測量Smad3生物傳感器的熒光能量共振轉(zhuǎn)移(flurorescence resonance energy transfer,FRET).經(jīng)過PCR和雙酶切鑒定結(jié)果表明:成功構(gòu)建Smad3生物傳感器質(zhì)粒.細(xì)胞轉(zhuǎn)染后轉(zhuǎn)染效率達(dá)40%,并檢測到FRET現(xiàn)象.分析表明:Smad3生物傳感器能夠作為活細(xì)胞分子探針研究轉(zhuǎn)化生長因子β信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路.
【作者單位】： 石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科;石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院民族與地方病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院康復(fù)科;石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院骨一科;
【關(guān)鍵詞】： 轉(zhuǎn)化生長因子β 生物傳感器 構(gòu)建
【分類號】：R346
【正文快照】： 轉(zhuǎn)化生長因子β(transforming growth factorβ,TGFβ)是一種體內(nèi)分布廣泛而且具有多效性的細(xì)胞因子,調(diào)控著細(xì)胞的增殖、分化、凋亡、細(xì)胞遷移、蛋白合成和上皮細(xì)胞間質(zhì)化轉(zhuǎn)變等多種病理和生理過程[1].TGFβ與跨膜受體結(jié)合后調(diào)控靶基因表達(dá)是通過一系列Smad蛋白介導(dǎo)的.Smad3作

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本文編號：788498