本文關鍵詞：轉化生長因子β信號轉導通路的生物傳感器的構建

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【摘要】：為構建轉化生長因子β信號轉導通路的下游蛋白Smad3的生物傳感器,根據已發(fā)表的人類Smad3基因序列設計引物,利用PCR擴增得到了一個長度約為1.3 kb的Smad3基因全長序列.序列分析結果表明與數據庫公布的人類序列(Genebank登錄號:NM_005902.3)一致.通過基因工程的方法,構建含有增強的青色熒光蛋白-Smad3-黃色熒光蛋白變體(ECFP-Smad3-Citrine)融合蛋白的真核表達載體即:Smad3生物傳感器.轉染293T細胞并觀察轉染效率和融合蛋白表達情況.在熒光顯微鏡下,應用MetaFlour FRET 4.6軟件測量Smad3生物傳感器的熒光能量共振轉移(flurorescence resonance energy transfer,FRET).經過PCR和雙酶切鑒定結果表明:成功構建Smad3生物傳感器質粒.細胞轉染后轉染效率達40%,并檢測到FRET現象.分析表明:Smad3生物傳感器能夠作為活細胞分子探針研究轉化生長因子β信號轉導通路.
【作者單位】： 石河子大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院檢驗科;石河子大學醫(yī)學院民族與地方病教育部重點實驗室;石河子大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院康復科;石河子大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院骨一科;
【關鍵詞】： 轉化生長因子β 生物傳感器 構建
【分類號】：R346
【正文快照】： 轉化生長因子β(transforming growth factorβ,TGFβ)是一種體內分布廣泛而且具有多效性的細胞因子,調控著細胞的增殖、分化、凋亡、細胞遷移、蛋白合成和上皮細胞間質化轉變等多種病理和生理過程[1].TGFβ與跨膜受體結合后調控靶基因表達是通過一系列Smad蛋白介導的.Smad3作

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本文編號：788498