本文關(guān)鍵詞：CFP10-ESAT6-PPE68融合基因原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建和表達(dá)

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【摘要】：目的:構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis,M.tb)CFP10-ESAT6-PPE68融合基因原核表達(dá)質(zhì)粒,并且在大腸桿菌中表達(dá)融合蛋白。方法:以M.tb H37Rv株DNA作為模板,PCR法擴(kuò)增ESAT6和PPE68基因,利用基因拼接技術(shù)中的Gene-SOEing法擴(kuò)增ESAT6-PPE68融合基因,克隆至原核表達(dá)質(zhì)粒pET-32a(+)中,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-32a(+)-ESAT6-PPE68。再分別以H37Rv株DNA和重組質(zhì)粒pET-32a(+)-ESAT6-PPE68為模板擴(kuò)增CFP10和ESAT6-PPE68基因,Gene-SOEing法獲取目的基因CFP10-ESAT6-PPE68,克隆至pET-32a(+)載體,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-32a(+)-CFP10-ESAT6-PPE68,轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。結(jié)果:CFP10-ESAT6-PPE68酶切片段大小與理論值符合,基因測(cè)序結(jié)果顯示融合基因CFP10-ESAT6-PPE68的序列與Genbank中序列一致,并在大腸桿菌中成功誘導(dǎo)表達(dá)了目的蛋白,經(jīng)SDS-PAGE分析和Western blot鑒定,相對(duì)分子量約為77 kD。結(jié)論:成功構(gòu)建了M.tb CFP10-ESAT6-PPE68融合基因的原核表達(dá)質(zhì)粒,并誘導(dǎo)表達(dá)出了融合蛋白,為該融合蛋白在結(jié)核病血清診斷學(xué)中的應(yīng)用奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)教研室、重慶醫(yī)科大學(xué)分子醫(yī)學(xué)與腫瘤研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 結(jié)核分枝桿菌 培養(yǎng)濾液蛋白 kD早期分泌抗原靶 戊糖--磷酸-差向異構(gòu)酶 融合蛋白
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào):30901280) 重慶市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào):cstc2012jjA10023)
【分類號(hào)】：R378
【正文快照】： 結(jié)核病(tuberculosis,TB)位居單一病原引起病人死亡的嚴(yán)重傳染病之首,是世界范圍內(nèi)第2大傳染病,最新統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示全世界結(jié)核分枝桿菌(my-cobacterium tuberculosis,M.tb)感染者約占人口總數(shù)的1/3[1]。隨著M.tb耐藥菌株的流行與傳播、艾滋病的蔓延、卡介苗(bacillus calmette-g

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本文編號(hào)：774256