本文關(guān)鍵詞：FHL2蛋白與心臟Kv1.5鉀通道相互作用的研究

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【摘要】：目的目前認為KCNA5通道蛋白是治療房顫的一個理想靶點,文中旨在驗證FHL2蛋白與KCNA5基因編碼的心臟Kv1.5鉀通道是否存在相互作用。方法①質(zhì)粒構(gòu)建:應用PCR法構(gòu)建質(zhì)粒pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5和pcDNA3.0-FHL2;②基因轉(zhuǎn)染:應用Lipofectamine 2000將pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5質(zhì)粒和pcDNA3.0-FHL2質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293細胞;③免疫共沉淀:應用抗FHL2抗體和Protein A/G Plus-Agarose沉淀目的蛋白,應用抗Myc抗體進行Western blot分析;④免疫熒光細胞化學分析:應用抗FHL2一抗和標記有FITC的二抗檢測FHL2蛋白,應用抗Myc一抗和標記有Cy3的二抗檢測KCNA5-Myc融合蛋白。結(jié)果①酶切和測序結(jié)果表明質(zhì)粒pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5和pcDNA3.0-FHL2構(gòu)建正確;②抗FHL2抗體能夠?qū)CNA5從總蛋白中沉淀下來;③KCNA5蛋白和FHL2蛋白共定位于細胞膜上。結(jié)論初步證實FHL2蛋白與KCNA5蛋白存在相互作用。
【作者單位】： 廣東省人民醫(yī)院、廣東省心血管病研究所心內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： FHL KCNA 鉀通道 免疫共沉淀 免疫熒光細胞化學
【基金】：國家自然科學基金(81070151) 廣東省自然科學基金(S2012010009324)
【分類號】：R33
【正文快照】： 0引言KCNA5基因編碼的Kv1.5鉀通道介導了心房的超速激活延遲整流鉀電流(ultrarapidly activatingdelayed rectifier potassium current,Ikur)[1-2]。由于房顫的發(fā)生發(fā)展與心房Ikur的異常存在密切關(guān)系,因此目前認為KCNA5通道蛋白是治療房顫的一個理想靶點[3-4]。新近研究發(fā)現(xiàn)FH

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本文編號：771623