本文關(guān)鍵詞：聚乙二醇修飾重組溶葡球菌酶的初步研究

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【摘要】：目的:探討聚乙二醇(PEG)修飾重組溶葡球菌酶(lysostaphin)的反應(yīng)條件以及修飾后產(chǎn)物的純化方法。方法:采用超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)進(jìn)行菌體破碎,陽(yáng)離子交換層析、疏水層析進(jìn)行蛋白純化;在不同條件下,將活化的單甲氧基聚乙二醇琥珀酰亞胺丙酸酯(mPEG-SPA)與純化后的lysostaphin反應(yīng),以單個(gè)PEG-Lysostaphin的比例為指標(biāo),用SDS-PAGE、MALDI-TOF-MS方法確定其在修飾產(chǎn)物中的所占比例;采用Sephacryl S-200分子篩凝膠層析法對(duì)修飾產(chǎn)物進(jìn)行分離純化。結(jié)果:mPEG-SPA修飾lysostaphin的反應(yīng)條件為pH 8.0,溫度4℃,lysostaphin與mPEG-SPA的質(zhì)量比為1∶5,反應(yīng)時(shí)間2.0h;反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)一步Sephacryl S-200分子篩凝膠層析純化后,初步實(shí)現(xiàn)分離。結(jié)論:初步確定了聚乙二醇修飾lysostaphin的反應(yīng)條件及修飾產(chǎn)物的純化方法。
【作者單位】： 浙江中醫(yī)藥大學(xué)生物工程學(xué)院;杭州北斗生物技術(shù)有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 聚乙二醇 重組溶葡球菌酶 純化 單甲氧基聚乙二醇琥珀酰亞胺丙酸酯
【分類(lèi)號(hào)】：R378
【正文快照】： 溶葡球菌酶(lysostaphin)由Schindler等[1]于1964年首次從一株編號(hào)為NRRL B-2628的模仿葡萄球菌(Staphylococcus simulans)培養(yǎng)物中發(fā)現(xiàn)并分離。此酶為246個(gè)氨基酸組成的單鏈分子,分子量27kDa,等電點(diǎn)PI介于10.4～11.4之間,其中鋅為必須的輔助因子[2-4]。它能特異性水解細(xì)菌細(xì)

【參考文獻(xiàn)】

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1 吳宏;房偉;袁t，

本文編號(hào)：765854