本文關(guān)鍵詞：SLP-2在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞增殖和分化中的作用研究

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【摘要】：目的:子宮內(nèi)膜的增殖和蛻膜化對于建立和維持正常的妊娠至關(guān)重要。蛻膜化被一系列源于胚胎和母體的調(diào)節(jié)器所控制。然而,蛻膜化的潛在分子機(jī)制尚不完全明確。本課題組前期基因表達(dá)分析和RNA測序結(jié)果均顯示SLP-2在圍植入期子宮內(nèi)膜存在差異性表達(dá),其在著床點(diǎn)的表達(dá)顯著高于著床旁。研究表明,癌細(xì)胞中過表達(dá)SLP-2會(huì)調(diào)節(jié)細(xì)胞生長,細(xì)胞黏附和腫瘤發(fā)展,但是SLP-2在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的增殖和分化中的功能仍不清楚。所以,我們提出假設(shè):SLP-2參與圍植入期子宮內(nèi)膜功能的演變--基質(zhì)細(xì)胞增殖和蛻膜化。方法:1.動(dòng)物模型建立及標(biāo)本收集:購買8周齡昆明小鼠飼養(yǎng)正常妊娠模型:將正常性成熟雌鼠與雄鼠合籠交配,次日見陰栓標(biāo)記為孕1天(D1)。小鼠正常妊娠1、4、5、6、8天脫頸處死,收集子宮組織。假孕模型:將正常性成熟雌鼠與結(jié)扎了輸精管的雄鼠合籠交配,次日見陰栓標(biāo)記為假孕1天(PD1)。小鼠假孕1、4、5、6、8天脫頸處死,收集子宮。人工誘導(dǎo)蛻膜化模型:小鼠假孕4天(PD4)一側(cè)宮角注射玉米油誘導(dǎo)蛻膜化,對照側(cè)宮角不作處理作為對照,假孕8天(PD8)處死,收集子宮組織。2.圍著床期小鼠子宮內(nèi)膜中slp-2基因表達(dá)模式1)小鼠w正常妊娠模型中slp-2基因表達(dá)模式:對小鼠正常妊娠D1、D4、D5、D6、D8子宮內(nèi)膜組織進(jìn)行熒光定量PCR、免疫印跡法和免疫組織化學(xué)檢測,觀察slp-2在子宮內(nèi)膜中的表達(dá)規(guī)律。2)小鼠假孕模型中slp-2基因表達(dá)模式:對小鼠假孕模型PD1、PD4、PD5、PD6、PD8子宮內(nèi)膜組織進(jìn)行熒光定量PCR、免疫印跡法和免疫組織化學(xué)檢測,觀察slp-2在假孕小鼠子宮內(nèi)膜中的表達(dá)模式。3)小鼠人工誘導(dǎo)蛻膜化模型中slp基因表達(dá)檢測:熒光定量PCR檢測小鼠蛻膜化標(biāo)志基因dtprp的表達(dá)確定人工誘導(dǎo)蛻膜化模型是否建立成功;采用熒光定量PCR、免疫印跡法和免疫組化檢測觀察slp-2的表達(dá)。3.人不同月經(jīng)周期/蛻膜組織中SLP-2基因的表達(dá):對人子宮內(nèi)膜增生期、分泌期和蛻膜組織進(jìn)行熒光定量PCR、免疫印跡法和免疫組織進(jìn)行檢測觀察SLP-2的表達(dá)。4.原代培養(yǎng)小鼠和人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞:利用小鼠假孕4天(PD4)子宮內(nèi)膜和人不同月經(jīng)周期子宮內(nèi)膜組織分離提取基質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),免疫熒光檢測Vimentin和Cytokeratin7進(jìn)行基質(zhì)細(xì)胞純度鑒定。5.體外誘導(dǎo)蛻膜化:利用雌、孕激素對原代培養(yǎng)的小鼠和人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)蛻膜化,運(yùn)用熒光定量PCR、免疫印跡法、免疫熒光等方法檢測相關(guān)蛻膜化因子dtprp、IGFBP1、PRL、Desmin的表達(dá),分析slp-2與蛻膜化的關(guān)系。6.轉(zhuǎn)染特異性slp-2 si RNA敲低SLP-2表達(dá),分析SLP-2表達(dá)對基質(zhì)細(xì)胞增殖、分化(蛻膜化)的影響。結(jié)果:1.slp-2在孕早期小鼠子宮內(nèi)膜中的表達(dá):免疫組化結(jié)果顯示slp-2在D1,D4主要表達(dá)于腺上皮和腔上皮,在D5著床點(diǎn)(IS)主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜初級蛻膜區(qū)(PDZ),在D6IS,D8IS slp-2的表達(dá)逐漸從初級蛻膜區(qū)(PDZ)轉(zhuǎn)向次級蛻膜區(qū)(SDZ)。在D5和D6的著床旁(IIS),slp-2的表達(dá)模式與D1相似,表達(dá)于腔上皮和腺上皮。免疫印跡和RT-q PCR結(jié)果顯示slp-2在D5IS,D6IS,D8IS表達(dá)量上調(diào),分別比其對應(yīng)的IIS表達(dá)高。2.slp-2在假孕小鼠模型中的表達(dá):slp-2在假孕PD1,PD4的表達(dá)與D1,D4中相似,均表達(dá)于腔上皮和腺上皮。在PD5,PD6,PD8子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中幾乎不表達(dá)。3.slp-2在誘導(dǎo)蛻膜化小鼠模型中的表達(dá):免疫組化,免疫印跡,RT-q PCR顯示,與未誘導(dǎo)一側(cè)子宮相比較,slp-2顯著高表達(dá)于誘導(dǎo)蛻膜化一側(cè)。4.slp-2在小鼠和人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞體外誘導(dǎo)蛻膜化模型中的表達(dá):RT-q PCR、Western blot結(jié)果顯示,在加入雌孕激素誘導(dǎo)蛻膜化實(shí)驗(yàn)組中小鼠和人的相關(guān)蛻膜化因子dtprp,IGFBP1,PRL,Desmin表達(dá)升高。Slp-2在實(shí)驗(yàn)組的表達(dá)較對照組明顯升高。5.轉(zhuǎn)染slp-2 si RNA實(shí)驗(yàn):RT-q PCR,Western Blot結(jié)果顯示,敲低slp-2后,小鼠和人相關(guān)蛻膜化標(biāo)志基因dtprp,IGFBP1,PRL在體外誘導(dǎo)蛻膜化條件下,表達(dá)顯著低于slp-2未敲低組。6.用EDU細(xì)胞增殖檢測試劑盒檢測細(xì)胞增殖情況發(fā)現(xiàn),體外誘導(dǎo)蛻膜化的基礎(chǔ)上敲除slp-2實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖能力顯著降低。結(jié)論:1.slp-2可能是調(diào)節(jié)正常妊娠蛻膜化過程的一個(gè)關(guān)鍵因子。2.slp-2主要通過影響子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞增殖和分化能力從而影響蛻膜化。
【關(guān)鍵詞】：slp-2 蛻膜化 細(xì)胞增殖 細(xì)胞分化
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R339.22
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-5
• 中文摘要5-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-14
• 材料14-16
• 方法16-25
• 結(jié)果25-38
• 討論38-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 文獻(xiàn)綜述44-49
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 致謝49-50
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況50

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本文編號：718592