本文關鍵詞：SLP-2在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞增殖和分化中的作用研究

  更多相關文章： slp-2 蛻膜化 細胞增殖 細胞分化

【摘要】：目的:子宮內(nèi)膜的增殖和蛻膜化對于建立和維持正常的妊娠至關重要。蛻膜化被一系列源于胚胎和母體的調(diào)節(jié)器所控制。然而,蛻膜化的潛在分子機制尚不完全明確。本課題組前期基因表達分析和RNA測序結果均顯示SLP-2在圍植入期子宮內(nèi)膜存在差異性表達,其在著床點的表達顯著高于著床旁。研究表明,癌細胞中過表達SLP-2會調(diào)節(jié)細胞生長,細胞黏附和腫瘤發(fā)展,但是SLP-2在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞的增殖和分化中的功能仍不清楚。所以,我們提出假設:SLP-2參與圍植入期子宮內(nèi)膜功能的演變--基質(zhì)細胞增殖和蛻膜化。方法:1.動物模型建立及標本收集:購買8周齡昆明小鼠飼養(yǎng)正常妊娠模型:將正常性成熟雌鼠與雄鼠合籠交配,次日見陰栓標記為孕1天(D1)。小鼠正常妊娠1、4、5、6、8天脫頸處死,收集子宮組織。假孕模型:將正常性成熟雌鼠與結扎了輸精管的雄鼠合籠交配,次日見陰栓標記為假孕1天(PD1)。小鼠假孕1、4、5、6、8天脫頸處死,收集子宮。人工誘導蛻膜化模型:小鼠假孕4天(PD4)一側宮角注射玉米油誘導蛻膜化,對照側宮角不作處理作為對照,假孕8天(PD8)處死,收集子宮組織。2.圍著床期小鼠子宮內(nèi)膜中slp-2基因表達模式1)小鼠w正常妊娠模型中slp-2基因表達模式:對小鼠正常妊娠D1、D4、D5、D6、D8子宮內(nèi)膜組織進行熒光定量PCR、免疫印跡法和免疫組織化學檢測,觀察slp-2在子宮內(nèi)膜中的表達規(guī)律。2)小鼠假孕模型中slp-2基因表達模式:對小鼠假孕模型PD1、PD4、PD5、PD6、PD8子宮內(nèi)膜組織進行熒光定量PCR、免疫印跡法和免疫組織化學檢測,觀察slp-2在假孕小鼠子宮內(nèi)膜中的表達模式。3)小鼠人工誘導蛻膜化模型中slp基因表達檢測:熒光定量PCR檢測小鼠蛻膜化標志基因dtprp的表達確定人工誘導蛻膜化模型是否建立成功;采用熒光定量PCR、免疫印跡法和免疫組化檢測觀察slp-2的表達。3.人不同月經(jīng)周期/蛻膜組織中SLP-2基因的表達:對人子宮內(nèi)膜增生期、分泌期和蛻膜組織進行熒光定量PCR、免疫印跡法和免疫組織進行檢測觀察SLP-2的表達。4.原代培養(yǎng)小鼠和人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞:利用小鼠假孕4天(PD4)子宮內(nèi)膜和人不同月經(jīng)周期子宮內(nèi)膜組織分離提取基質(zhì)細胞進行培養(yǎng),免疫熒光檢測Vimentin和Cytokeratin7進行基質(zhì)細胞純度鑒定。5.體外誘導蛻膜化:利用雌、孕激素對原代培養(yǎng)的小鼠和人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞進行誘導蛻膜化,運用熒光定量PCR、免疫印跡法、免疫熒光等方法檢測相關蛻膜化因子dtprp、IGFBP1、PRL、Desmin的表達,分析slp-2與蛻膜化的關系。6.轉染特異性slp-2 si RNA敲低SLP-2表達,分析SLP-2表達對基質(zhì)細胞增殖、分化(蛻膜化)的影響。結果:1.slp-2在孕早期小鼠子宮內(nèi)膜中的表達:免疫組化結果顯示slp-2在D1,D4主要表達于腺上皮和腔上皮,在D5著床點(IS)主要表達于子宮內(nèi)膜初級蛻膜區(qū)(PDZ),在D6IS,D8IS slp-2的表達逐漸從初級蛻膜區(qū)(PDZ)轉向次級蛻膜區(qū)(SDZ)。在D5和D6的著床旁(IIS),slp-2的表達模式與D1相似,表達于腔上皮和腺上皮。免疫印跡和RT-q PCR結果顯示slp-2在D5IS,D6IS,D8IS表達量上調(diào),分別比其對應的IIS表達高。2.slp-2在假孕小鼠模型中的表達:slp-2在假孕PD1,PD4的表達與D1,D4中相似,均表達于腔上皮和腺上皮。在PD5,PD6,PD8子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞中幾乎不表達。3.slp-2在誘導蛻膜化小鼠模型中的表達:免疫組化,免疫印跡,RT-q PCR顯示,與未誘導一側子宮相比較,slp-2顯著高表達于誘導蛻膜化一側。4.slp-2在小鼠和人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞體外誘導蛻膜化模型中的表達:RT-q PCR、Western blot結果顯示,在加入雌孕激素誘導蛻膜化實驗組中小鼠和人的相關蛻膜化因子dtprp,IGFBP1,PRL,Desmin表達升高。Slp-2在實驗組的表達較對照組明顯升高。5.轉染slp-2 si RNA實驗:RT-q PCR,Western Blot結果顯示,敲低slp-2后,小鼠和人相關蛻膜化標志基因dtprp,IGFBP1,PRL在體外誘導蛻膜化條件下,表達顯著低于slp-2未敲低組。6.用EDU細胞增殖檢測試劑盒檢測細胞增殖情況發(fā)現(xiàn),體外誘導蛻膜化的基礎上敲除slp-2實驗組細胞增殖能力顯著降低。結論:1.slp-2可能是調(diào)節(jié)正常妊娠蛻膜化過程的一個關鍵因子。2.slp-2主要通過影響子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞增殖和分化能力從而影響蛻膜化。
【關鍵詞】：slp-2 蛻膜化 細胞增殖 細胞分化
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R339.22
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-5
• 中文摘要5-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-14
• 材料14-16
• 方法16-25
• 結果25-38
• 討論38-40
• 參考文獻40-44
• 文獻綜述44-49
• 參考文獻46-49
• 致謝49-50
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表學術論文情況50

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 宿愛琴,涂持坤,張玉華,糜若然,張雙革;睪酮在子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞蛻膜化過程中的作用[J];天津醫(yī)藥;2002年06期

2 徐倩;譚毅;張倩;羅文萍;譚冬梅;;骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7(BMP-7)促進小鼠子宮內(nèi)膜蛻膜化研究[J];生殖與避孕;2010年01期

3 倪華;賁文銳;李文萍;李瑞婷;靳方圓;;TEAD1在小鼠圍著床期子宮中的表達研究[J];東北農(nóng)業(yè)大學學報;2014年06期

4 汪燕,劉西茹,李尚為;COX-2在女性生殖過程中的作用[J];華西醫(yī)學;2005年02期

5 郭淑華;潘智芳;;Rack1在大鼠子宮中的表達[J];山東大學學報(醫(yī)學版);2006年12期

6 郭淑華;;鈣離子敏感受體在大鼠子宮中的表達[J];濰坊學院學報;2009年02期

7 ;[J];;年期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 丁乃崢;何梅;何成強;陳建國;;新基因P55在小鼠胚胎著床和蛻膜化子宮中的表達和調(diào)節(jié)[A];第十屆全國生殖生物學學術研討會論文摘要集[C];2005年

2 胡增;張鍵;彭莎;李晶;郭偉翔;趙平;Aaron J.W. Hsueh;段恩奎;;Obestatin促進小鼠子宮基質(zhì)細胞的蛻膜化[A];第一屆中華醫(yī)學會生殖醫(yī)學分會、中國動物學會生殖生物學分會聯(lián)合年會論文匯編[C];2007年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 李曉;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激調(diào)節(jié)蛋白LRF在小鼠子宮內(nèi)膜蛻膜化中的作用[D];西北農(nóng)林科技大學;2016年

2 胡琳莉;子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞分化過程中細胞周期界面的調(diào)控機制研究[D];華中科技大學;2009年

3 梁曉歡;阿米洛利結合蛋白1在小鼠早期妊娠子宮中的表達與調(diào)節(jié)[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2009年

4 倪華;前列腺毒E合成酶與小鼠胚胎著床和蛻膜化的關系[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2002年

5 武斌;雌激素對子宮內(nèi)膜自發(fā)蛻膜化以及妊娠過程影響的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2014年

6 郎楠;維生素E對蛻膜化和妊娠的影響及相關機制的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

7 刁紅錄;COX-2在大鼠排卵著床和蛻膜化過程中的作用[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2006年

8 黃祝;小鼠圍著床期子宮中精氨酸琥珀酸合成酶1的表達調(diào)節(jié)和功能[D];廈門大學;2012年

9 劉杰;轉錄因子C/EBP-β在人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞分化中的表達及其作用機理研究[D];華中科技大學;2012年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馮倩;SLP-2在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞增殖和分化中的作用研究[D];重慶醫(yī)科大學;2016年

2 沈茶;孕早期苯并(a)芘暴露影響小鼠子宮內(nèi)膜蛻膜化及蛻膜血管的生成[D];重慶醫(yī)科大學;2016年

3 王行明;細胞朊蛋白在小鼠早期妊娠和蛻膜化子宮中的表達和調(diào)節(jié)[D];中南大學;2012年

4 李永旺;Tead4在小鼠圍著床期子宮中的表達研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2013年

5 成佳興;前體蛋白加工酶5在小鼠圍著床期子宮中的表達研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2010年

6 韓丙辰;Claudin-3在小鼠圍著床期子宮中的表達與調(diào)節(jié)[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2007年

7 石建軍;前列腺素E_2受體EP2基因在大鼠早期妊娠子宮中的表達[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2002年

8 郭淑華;CaR及RacK1在大鼠子宮中的表達與調(diào)節(jié)之研究[D];山東師范大學;2006年

9 韓雪;MCM2在小鼠子宮蛻膜化過程中作用的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2013年

10 叢晶;前列腺素E合成酶基因在大鼠圍著床期子宮中的表達與調(diào)節(jié)[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2005年

，

本文編號：718592