本文關鍵詞：人同源異形盒基因HOXB9多克隆抗體的制備和活性鑒定

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【摘要】：目的制備兔抗人同源異形盒基因HOXB9的多克隆抗體,為后續(xù)深入研究HOXB9蛋白的功能提供工具。方法采用聚合酶鏈反應(PCR)和DNA重組技術,構建HOXB9基因5'端7-458堿基片段到原核表達載體pGEX-4T-1和pMal-C2x中,熱休克法轉化及異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷誘導表達谷胱甘肽轉移酶標簽的HOXB9 N端融合蛋白和麥芽糖結合蛋白標簽的HOXB9 N端融合蛋白。純化GST-HOXB9 N端融合蛋白免疫新西蘭白兔,ELISA鑒定效價后,頸動脈放血,收集血清,純化抗體。免疫印跡法及免疫沉淀法鑒定抗體有效性及特異性。結果本實驗制備的抗體能夠特異識別目標分子的單一條帶,并且具有較強的免疫沉淀天然構象的HOXB9蛋白的能力;采用所制備的抗體檢測發(fā)現(xiàn),HOXB9蛋白在小鼠免疫器官、胰臟、結腸、肺、小腦、雌性生殖系統(tǒng)及睪丸中表達較高,其他器官表達較低或無表達。結論成功制備了特異而有效的兔抗人HOXB9蛋白多克隆抗體,此多克隆抗體可用于免疫印跡法分析及免疫沉淀實驗。
【作者單位】： 北京大學基礎醫(yī)學院組織學與胚胎學教研室;
【關鍵詞】： HOXB 純化蛋白 多克隆抗體 免疫印跡法 新西蘭白兔
【基金】：教育部博士點基金資助項目(20100001110046) 國家自然科學基金資助項目(30830048) 北京市與中央在京高校共建項目
【分類號】：R392
【正文快照】： Homeobox B9(HOXB9)基因是同源異形盒基因(homoeobox gene)家族的一個成員,定位于第17號染色體的17q21.3區(qū),cDNA全長753個堿基對,編碼含250個氨基酸序列的蛋白質,相對分子質量約為28kD。HOXB9蛋白主要由兩個結構域構成:Hox9_activation_N結構域和Homeodomain結構域,蛋白一級結

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 吳曉波;;同源異形盒基因是造血細胞分化的一種潛在性調節(jié)因子[J];生理科學進展;1989年02期

2 宋自芳;同源異形盒基因與腫瘤[J];國外醫(yī)學(腫瘤學分冊);2003年03期

3 ;[J];;年期

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本文編號：714798