本文關(guān)鍵詞：1個(gè)新的白介素-32剪接異構(gòu)體的克隆與表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 白介素- 剪接異構(gòu)體 原核表達(dá) 真核表達(dá)

【摘要】：目的對(duì)白介素-32(interleukin-32,IL-32)的不同剪接異構(gòu)體進(jìn)行克隆及表達(dá)。方法設(shè)計(jì)保守引物,以Jurkat細(xì)胞的cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,克隆IL-32不同剪接異構(gòu)體;DNA測(cè)序擴(kuò)增產(chǎn)物,計(jì)算機(jī)輔助分析IL-32基因序列特征;構(gòu)建IL-32原核及真核表達(dá)重組質(zhì)粒,并利用SDS-PAGE和Western blot檢測(cè)其表達(dá)情況。結(jié)果克隆得到已知的IL-32的6個(gè)剪接異構(gòu)體(α、β、γ、δ、ε、ζ),還克隆得到1個(gè)新的IL-32剪接異構(gòu)體,將其命名為IL-32η,Genbank登錄號(hào)JN546102。IL-32η編碼區(qū)長(zhǎng)度為336 bp,編碼的蛋白含111個(gè)氨基酸殘基,其理論相對(duì)分子質(zhì)量為12 560。IL-32η原核表達(dá)產(chǎn)物主要以可溶形式位于宿主菌的周質(zhì)腔。親和純化了重組IL-32η,利用重組IL-32η制備了兔多克隆抗體,該抗體能夠識(shí)別IL-32全部的7個(gè)剪接異構(gòu)體。結(jié)論克隆得到1個(gè)新的IL-32剪接異構(gòu)體IL-32η,它的發(fā)現(xiàn)將為全面理解IL-32的功能提供新思路。
【作者單位】： 南通大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： 白介素- 剪接異構(gòu)體 原核表達(dá) 真核表達(dá)
【基金】：江蘇省高校自然科學(xué)基金(11KJB310008) 南通市科技計(jì)劃項(xiàng)目(K2010035) 南通大學(xué)自然科學(xué)預(yù)研項(xiàng)目(10ZY009)
【分類號(hào)】：R346
【正文快照】： 白介素-32(interleukin-32,IL-32)是新近報(bào)道的促炎癥細(xì)胞因子,其主要來(lái)源是T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核細(xì)胞及上皮細(xì)胞等[1-2]。編碼IL-32的基因位于人染色體16p13.3,包括8個(gè)外顯子[3]。最初報(bào)道,IL-32有4種不同的剪接異構(gòu)體,包括IL-32α、IL-32β、IL-32γ、和IL-32δ[1]。此后

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