本文關鍵詞：新型結核病疫苗菌株的生物特性和遺傳性狀研究

  更多相關文章： B/R融合菌株 BCG H37Ra菌株 結核疫苗 生長特性 定植性 遺傳性

【摘要】：目的:探討卡介苗(BCG)與結核分枝桿菌國際標準無毒株(H37Ra)構建的融合菌株(B/R菌株)的生長特性、定植性及遺傳穩(wěn)定性。方法:1.Sauton液體培養(yǎng)基分別培養(yǎng)BCG、H37Ra和B/R菌株,并在連續(xù)培養(yǎng)的第3、6、9、12、15、18、21、24、27、30天(d)取菌液并測定其在波長600nm處的OD值。然后以時間(Time)為橫坐標,OD600值為縱坐標,繪制上述三種菌株的生長曲線。2.C57BL/6小鼠隨機分3組,分別皮下接種BCG、H37Ra和B/R菌株的菌液0.1m L(含活菌數(shù)為1.0×106個),免疫后的第15、30、45、60及75天取各組小鼠脾臟、肺臟及肝臟,制成臟器組織勻漿,取勻漿液0.1m L接種于羅氏固體培養(yǎng)基斜面上,培養(yǎng)20天,分別計算三組菌株在不同臟器的菌落數(shù)(Log10cfu)。3.提取B/R菌株、BCG和H37Ra菌株的總RNA,進行純度鑒定后并逆轉錄成c DNA,通過SYBR GreenⅠ實時熒光定量PCR(q RT-PCR)檢測上述三種菌株esat-6、ag85b、mpt70和mpt83基因的m RNA相對表達水平,比較三種不同菌株中esat-6、ag85b、mpt70和mpt83基因表達的差異。4.分別提取B/R菌株第1代到第20代的基因組DNA,以其為模版PCR分別擴增每代B/R菌株的esat-6、ag85b、mpt70和mpt83基因,比較分析B/R菌株的傳代穩(wěn)定性。結果:1.根據(jù)所繪生長曲線圖,與親本菌株BCG和H37Ra菌株相比,B/R菌株的生長適應期較長,6天后才開始進入生長對數(shù)期,27天后進入平臺穩(wěn)定期;2.在相同免疫時間下,B/R菌株在小鼠不同臟器內的Log10cfu均高于BCG和H37Ra菌株。其中,與BCG和H37Ra菌株組比較,B/R菌株在小鼠肝臟內的Log10cfu稍高,但差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。且隨著免疫時間的增加,三種菌株在小鼠肝臟內的Log10cfu有升有降,時間趨勢不明顯。在五個不同免疫時間點,B/R菌株在小鼠脾臟內的Log10cfu均明顯高于BCG菌株,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);在免疫后的15、45以及75天,B/R菌株在小鼠脾臟內的Log10cfu高于H37Ra菌株,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。且隨著免疫時間的增加,三種菌株在小鼠脾臟內的Log10cfu整體呈下降趨勢,但在免疫后的75天,H37Ra和B/R菌株在小鼠脾臟內的Log10cfu較60天組有小幅度的上升,而BCG在小鼠脾臟內的Log10cfu仍呈下降趨勢。在五個不同免疫時間點,B/R菌株在小鼠肺臟內的Log10cfu均明顯高于BCG菌株,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);在免疫后的15和45天,B/R菌株在小鼠肺臟內的Log10cfu高于H37Ra菌株,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。且隨著免疫時間的增加,三種菌株在小鼠肺臟內的Log10cfu明顯呈下降趨勢。3.q RT-PCR檢測結果顯示,與BCG菌株比較,mpt70和mpt83基因在B/R融合菌株中的m RNA表達量有不同程度的下調,但差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);在H37Ra菌株中的m RNA表達量也有不同程度的下調,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與H37Ra菌株比較,mpt70和mpt83基因在B/R融合菌株和BCG菌株中的m RNA表達量均有不同程度的上調,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);esat-6和ag85b在B/R菌株中的m RNA表達量均有不同程度的上調,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.PCR擴增結果顯示,第1代到第20代的B/R菌株均能擴增出的esat-6、ag85b、mpt70和mpt83四個目的基因,且大小位置相同,條帶清晰明亮。結論:1.B/R菌株的生長周期為30天,其在小鼠體內至少可存活75天,且定植能力較強。2.B/R菌株在20個代次以內的基因水平達到了生物制品傳代穩(wěn)定性的要求。
【關鍵詞】：B/R融合菌株 BCG H37Ra菌株 結核疫苗 生長特性 定植性 遺傳性
【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 英漢縮略語名詞對照表9-11
• 前言11-14
• 材料和方法14-27
• 結果27-36
• 討論36-39
• 結論39-40
• 參考文獻40-43
• 文獻綜述43-55
• 參考文獻52-55
• 致謝55-56
• 作者簡介56-57
• 導師評閱表57

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 全國結核病流行病學抽樣調查技術指導組;第四次全國結核病流行病學抽樣調查報告[J];中華結核和呼吸雜志;2002年01期

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本文編號：654503