本文關(guān)鍵詞：華支睪吸蟲鈣調(diào)理蛋白的克隆表達、組織定位及功能的初步研究

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【摘要】：目的克隆和原核表達華支睪吸蟲鈣調(diào)理蛋白(CsCALP),并初步研究其功能及免疫學意義。方法利用生物信息學相關(guān)軟件分析CsCALP蛋白的基本理化特征和三維結(jié)構(gòu);將CsCALP基因克隆到原核表達質(zhì)粒pET-28a(+)中,誘導表達CsCALP蛋白并用鎳離子親和層析柱進行純化;通過凝膠覆蓋(Gel overlay)試驗鑒定純化的CsCALP蛋白與F-Actin的結(jié)合能力;使用純化的CsCALP蛋白免疫SD大鼠,獲得抗血清,通過Western blot分析其免疫學特性;應(yīng)用免疫熒光化學法觀察華支睪吸蟲CsCALP蛋白在成蟲的定位。結(jié)果 CsCALP基因編碼序列長度為1086bp,編碼361個氨基酸,理論分子質(zhì)量單位為39.7708ku,具有1個calponin homology結(jié)構(gòu)域和5個calponin-like repeat結(jié)構(gòu)域;該基因在大腸埃希菌BL21/DE3中可被表達,純化的重組蛋白能被感染華支睪吸蟲的大鼠血清識別;CsCALP蛋白主要定位于蟲體富含肌肉組織,包括口、腹吸盤、咽部以及皮下肌層;Gel-overlay試驗顯示CsCALP蛋白能與F-Ac-tin結(jié)合。結(jié)論構(gòu)建的pET-28a(+)-CsCALP能在大腸埃希菌中表達可溶性CsCALP蛋白。該蛋白具有良好的抗原活性,主要分布在華支睪吸蟲成蟲肌肉組織中,可能為分泌排泄抗原的組分之一。
【作者單位】： 中山大學中山醫(yī)學院寄生蟲學教研室;中山大學熱帶病防治研究教育部重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 華支睪吸蟲 鈣調(diào)理蛋白 克隆 免疫組化
【基金】：國家973發(fā)展計劃項目(No.2010CB530000) 國家自然科學基金項目(No.81101270;81171602)
【分類號】：R383.22
【正文快照】： 華支睪吸蟲病是由華支睪吸蟲感染引起的一種食源性寄生蟲病,同時也是一種人獸共患病。其感染途徑主要通過生食帶有華支睪吸蟲囊蚴的淡水魚蝦后,囊蚴在十二指腸脫囊,發(fā)育成熟的華支睪吸蟲成蟲寄居于人體和多種哺乳動物的肝臟膽管內(nèi)。由于華支睪吸蟲的寄生和分泌排泄抗原(ESA)

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本文編號：651963