本文關(guān)鍵詞：TaqMan-MGB探針檢測文森巴爾通體博格霍夫亞種實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法的建立及應(yīng)用

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【摘要】：【目的】應(yīng)用TaqMan-MGB探針技術(shù),建立具有種水平特異性、高敏感性的熒光定量PCR方法,用于快速檢測文森巴爾通體博格霍夫亞種。【方法】在序列特異性擴(kuò)增區(qū)標(biāo)記(Sequence characterized amplifiedregion,SCAR)技術(shù)基礎(chǔ)上,依據(jù)文森巴爾通體博格霍夫亞種一段特有的基因序列設(shè)計(jì)探針和引物,分別優(yōu)化擴(kuò)增反應(yīng)的退火溫度、探針和引物的反應(yīng)濃度;分析此方法的特異性、敏感性及重復(fù)性;繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,評(píng)估PCR反應(yīng)的擴(kuò)增效率和穩(wěn)定性。【結(jié)果】本研究設(shè)計(jì)的TaqMan-MGB探針具有種水平特異性;最低檢出限為每個(gè)PCR反應(yīng)11個(gè)拷貝;組內(nèi)和組間的變異系數(shù)CV值分別為0.12%-0.70%和0.14%-0.55%,在允許范圍內(nèi);標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好(R2=1),擴(kuò)增效率高(E=104.7%)�！窘Y(jié)論】本研究建立的基于TaqMan-MGB探針技術(shù)的熒光定量PCR方法能夠在種水平特異性、高靈敏度檢出文森巴爾通體博格霍夫亞種,為這種巴爾通體所引起的一系列疾病的早期快速診斷、監(jiān)測和流行病學(xué)調(diào)查等研究提供有效手段。
【作者單位】： 中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所傳染病預(yù)防控制國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室世界衛(wèi)生組織媒介生物監(jiān)測與管理合作中心;
【關(guān)鍵詞】： 巴爾通體 熒光定量PCR TaqMan-MGB探針 犬 SCAR標(biāo)記
【基金】：十二五重大專項(xiàng)“重大傳染病應(yīng)急處置檢測技術(shù)平臺(tái)”課題(2011ZX10004-001)~~
【分類號(hào)】：S852.61;R378
【正文快照】： 文森巴爾通體博格霍夫亞種(Bartonella vinsoniisubsp.berkhoffii,Bvb)是一種能夠引起犬心內(nèi)膜炎、紫癜性肝炎、心肌炎和肉芽腫性淋巴結(jié)炎等疾病的革蘭陰性桿菌[1],也可以引起人心內(nèi)膜炎[2]和神經(jīng)系統(tǒng)疾病等[3]。1993年,此菌首先分離自一只患有心內(nèi)膜炎的病犬[4],是巴爾通體

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