本文關(guān)鍵詞：慢病毒載體在人角質(zhì)形成細胞基因組中的整合位點分析

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【摘要】：目的檢測慢病毒載體(lentiviral vector)在人角質(zhì)形成細胞基因組中的整合位點,初步分析慢病毒載體在表皮細胞基因組中的整合位點分布規(guī)律。方法以本課題組前期研究中構(gòu)建的慢病毒載體感染的人永生化角質(zhì)形成細胞系為研究對象,應用連接介導PCR(ligation-mediated PCR,LM-PCR)技術(shù)克隆慢病毒載體在其基因組中的整合位點序列,測序克隆片段后經(jīng)在線工具GTSG-QuickMap在人類基因組上定位,從而得到整合位點。再從整合位點分布與染色體、基因及其轉(zhuǎn)錄起始位點的關(guān)系來分析慢病毒載體在人角質(zhì)形成細胞基因組中的整合傾向性。結(jié)果對1 148個陽性轉(zhuǎn)化子DNA測序及定位分析,共得到199個整合位點。與GTSG-QuickMap模擬的隨機對照相比,慢病毒載體的整合頻率在第4、5、15、16號染色體上、基因轉(zhuǎn)錄起始位點上游5 kb至50 kb范圍內(nèi)顯示出統(tǒng)計學顯著性差異。結(jié)論慢病毒載體傾向于整合在人角質(zhì)形成細胞基因組中的基因轉(zhuǎn)錄起始位點附近區(qū)域,而并不傾向于整合在基因內(nèi)部的整合模式。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院全軍燒傷研究所 創(chuàng)傷、燒傷與復合傷國家重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 慢病毒載體 人角質(zhì)形成細胞 連接介導PCR 整合位點 整合頻率 整合傾向
【基金】：國家自然科學基金面上項目(81071575) 國家重點實驗室Ⅰ類課題(SKLZZ200904)~~
【分類號】：R346
【正文快照】： 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體是常用的外源基因整合載體,對基因治療和轉(zhuǎn)基因動物研究具有重要價值。但是,目前逆轉(zhuǎn)錄病毒載體尚不能將目的基因插入特定位點,當該類載體異位整合于靶細胞染色體基因組中,原病毒(provirus)與宿主(host)之間相互作用,極有可能導致轉(zhuǎn)基因表達沉默及插入性誘變(in

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本文編號：635263