本文關(guān)鍵詞：鼠抗人B7-H4單克隆抗體功能研究及鼠抗人B7-H4受體單克隆抗體的制備

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【摘要】：B7家族是最重要的共刺激分子,在調(diào)節(jié)T細(xì)胞的活化和免疫耐受的動態(tài)平衡中起重要調(diào)節(jié)功能。B7-H4(B7X,B7S1),是B7家族的新成員之一。人的B7-H4基因含有5個內(nèi)含子和6個外顯子,位于人染色體的1p11.1。B7-H4與B7家族其他分子一樣,高表達(dá)于多種腫瘤組織,例如肺癌,乳腺癌,卵巢癌,胃癌等,而在正常人體組織中卻低表達(dá)或不表達(dá),這使得B7-H4有望成為一種新的腫瘤標(biāo)志物。另外,B7-H4作為負(fù)性刺激因子,當(dāng)與其受體結(jié)合后,抑制T細(xì)胞的增殖、活化和細(xì)胞因子的分泌,可以推測B7-H4在腫瘤細(xì)胞逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視和維持機(jī)體的免疫耐受過程中發(fā)揮重要作用。然而同樣對T細(xì)胞信號通路有影響的B7-H4受體還沒有被克隆出來,對其報(bào)道也不是很多,對于受體的研究有助于我們進(jìn)一步了解B7-H4在腫瘤組織中的作用機(jī)制,并有望成為腫瘤免疫治療的新靶點(diǎn)。本課題通過構(gòu)建乳腺癌細(xì)胞株MCF-7與急性T淋巴細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞株共培養(yǎng)體系,模擬體內(nèi)腫瘤環(huán)境,用本科室已制備的鼠抗人B7-H4單克隆抗體5C8阻斷MCF-7細(xì)胞株上B7-H4分子,抑制B7-H4分子負(fù)性調(diào)控作用,共培養(yǎng)后檢測Jurkat細(xì)胞生物學(xué)特性的改變。在炎癥浸潤的人扁桃體部分淋巴細(xì)胞中檢測到B7-H4受體的表達(dá),并以此為免疫原,制備鼠抗人B7-H4受體的單克隆抗體。一、鼠抗人B7-H4單克隆抗體功能研究【目的】構(gòu)建共培養(yǎng)體系,研究B7-H4對Jurkat細(xì)胞生物學(xué)功能的改變。【方法】流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測MCF-7細(xì)胞B7-H4的表達(dá)和Jurkat細(xì)胞上B7-H4受體表達(dá),將兩細(xì)胞共培養(yǎng)72h,收集與MCF-7貼在一起的Jurkat細(xì)胞,對其表面CD3、CD69分子表達(dá)通過流式細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行檢測,并采用CCK8法對Jurkat的增殖情況進(jìn)行檢測�！窘Y(jié)果】MCF-7細(xì)胞表面的B7-H4分子能夠作用于Jurkat細(xì)胞株,促使其細(xì)胞表面CD3、CD69分子下調(diào)表達(dá),抑制Jurkat細(xì)胞增殖。加入B7-H4單克隆抗體5C8共培養(yǎng)后,Jurkat細(xì)胞上分子表達(dá)和增殖情況則恢復(fù)�！窘Y(jié)論】B7-H4是一種負(fù)性共刺激分子,能夠抑制T細(xì)胞的增殖和膜分子的表達(dá)。二、鼠抗人B7-H4受體單克隆抗體的制備【目的】鼠抗人B7-H4受體單克隆抗體制備,并對其生物學(xué)功能進(jìn)行檢測�！痉椒ā恳匝装Y浸潤的扁桃體細(xì)胞分選出的淋巴細(xì)胞作為免疫原,免疫6-8周齡的BALB/c小鼠。取脾臟研磨,與小鼠骨髓瘤細(xì)胞株SP2.0融合為雜交瘤株。采用流式細(xì)胞技術(shù)對雜交瘤株上清進(jìn)行檢測,篩選出陽性雜交瘤株。以B7-H4-mFc-FITC為基礎(chǔ),通過位點(diǎn)競爭抑制實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步篩選。將本科室B7-H4受體洗脫蛋白包板后,采用ELISA法對雜交瘤株進(jìn)一步篩選。對初步確定的雜交瘤株用快速試紙法測定亞型�！窘Y(jié)果】篩選出兩株疑似的B7-H4受體單克隆抗體命名為3B2和2E2。經(jīng)位點(diǎn)競爭和ELISA法初步鑒定,3B2比2E2效果稍好,并測定兩株抗體的亞型均為IgG2a類。【結(jié)論】初步確定獲得兩株B7-H4受體單克隆抗體的細(xì)胞株,該抗體的功能還有待研究。為進(jìn)一步研究B7-H4與B7-H4受體的分子機(jī)制提供基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：B7-H4 共培養(yǎng) B7-H4受體 單克隆抗體
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R392.11
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 研究背景10-24
• 參考文獻(xiàn)19-24
• 第一部分 鼠抗人B7-H4單克隆抗體的功能研究24-34
• 1. 實(shí)驗(yàn)試劑與材料24-25
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法25-28
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-31
• 討論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-34
• 第二部分 鼠抗人B7-H4受體的單克隆抗體制備34-48
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料與試劑35-36
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法36-41
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-44
• 討論44-46
• 參考文獻(xiàn)46-48
• 總結(jié)與展望48-49
• 縮略詞表49-51
• 致謝51-52

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