本文關(guān)鍵詞：志賀菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的表達(dá)、純化及多克隆抗體制備

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【摘要】：目的:克隆編碼志賀菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的基因phoN2并實現(xiàn)表達(dá),純化后免疫BALB/c小鼠制備鼠抗Apyrase的多克隆抗體,并對多克隆抗體進(jìn)行評價。方法:通過PCR擴(kuò)增的志賀菌5a M90T中的基因phoN2克隆至表達(dá)載體pET24a中,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到E.coli BL21(DE3)中,篩選陽性克隆,進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá)并純化Apyrase-HIS融合蛋白。以純化的融合蛋白作為抗原免疫BALB/c小鼠,制備該蛋白的多抗。Western blot、ELISA、免疫熒光鑒定獲得的抗血清。結(jié)果:成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體pET24a-Apyrase,經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)出相對分子量為28 kD的融合蛋白,用純化的融合蛋白作為抗原免疫小鼠制備的多克隆抗體,通過Western blot、ELISA、免疫熒光法證明多克隆抗體制備成功。結(jié)論:成功制備了志賀菌福氏5a特異性的鼠多克隆抗體,為進(jìn)一步研究Apyrase蛋白在志賀菌福氏5a M90T中的表達(dá)、定位及志賀菌福氏5a M90T的快速檢測奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院生物工程研究所;
【關(guān)鍵詞】： 志賀菌福氏a MT Apyrase 多克隆抗體
【基金】：國家自然科學(xué)基金(30970122)資助項目
【分類號】：R392.11
【正文快照】： 志賀菌俗稱痢疾桿菌,定植于人類小腸上皮細(xì)胞內(nèi),是細(xì)菌性痢疾最常見的病原菌之一,據(jù)報道, 每年全球約有1.6億人感染痢疾,其中99%發(fā)生在衛(wèi)生條件較差的發(fā)展中國家[1-3]。在志賀菌福氏5a中,Apyrase是一個ATP二磷酸水解酶,由毒力大質(zhì)粒編碼,有文獻(xiàn)表明它是毒力蛋白IcsA發(fā)揮功能

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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【相似文獻(xiàn)】

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3 陳波;錢，

本文編號：626113