發(fā)布時(shí)間：2017-08-05 09:22

  本文關(guān)鍵詞：Oct-4在小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化中的甲基化狀態(tài)

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【摘要】：目的研究Oct-4在小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)定向誘導(dǎo)分化中的甲基化狀態(tài)。方法全骨髓貼壁篩選法培養(yǎng)小鼠BMSCs,通過形態(tài)學(xué)觀察及免疫細(xì)胞化學(xué)進(jìn)行鑒定。骨塊接種培養(yǎng)法培養(yǎng)小鼠成骨細(xì)胞,采用堿性磷酸酶(AKP)及茜素紅進(jìn)行鑒定。誘導(dǎo)小鼠BMSCs向成骨細(xì)胞分化,采用間接免疫熒光染色和RT-PCR法觀察Oct-4在小鼠BMSCs誘導(dǎo)分化前后的表達(dá)情況,甲基化特異性PCR檢測(cè)Oct-4在小鼠BMSCs誘導(dǎo)分化前后的甲基化狀態(tài)。結(jié)果分離培養(yǎng)的小鼠BMSCs在體外能大量增殖,形成形態(tài)均一的細(xì)胞集落,培養(yǎng)細(xì)胞的CD29、c-Kit和CD44呈陽性表達(dá),CD34呈陰性表達(dá)。誘導(dǎo)10d后的細(xì)胞及從小鼠顱骨中分離、培養(yǎng)出的成骨細(xì)胞,AKP及茜素紅染色呈陽性。間接免疫熒光染色和RT-PCR結(jié)果顯示,Oct-4在小鼠BMSCs定向誘導(dǎo)分化中表達(dá)下調(diào)。小鼠BMSCs定向誘導(dǎo)分化中Oct-4基因啟動(dòng)子區(qū)的CpG島出現(xiàn)了甲基化。結(jié)論成功在體外培養(yǎng)了小鼠BMSCs及小鼠成骨細(xì)胞,Oct-4基因可能參與了成體干細(xì)胞多潛能性的維持,Oct-4基因在小鼠BMSCs定向誘導(dǎo)分化中的表達(dá)下調(diào)可能是其啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化的緣故。
【作者單位】： 石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院組織胚胎學(xué)教研室;海南省生殖醫(yī)學(xué)中心;石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院骨科;
【關(guān)鍵詞】： Oct- 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 分化 甲基化
【分類號(hào)】：R329
【正文快照】： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)是目前研究最為廣泛的一種成體干細(xì)胞。隨著BMSCs的分離培養(yǎng)、細(xì)胞系建立以及體外定向誘導(dǎo)分化技術(shù)的日趨成熟,為臨床應(yīng)用帶來了極大的便利,但是有關(guān)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化調(diào)控機(jī)制的研究尚未取得突破性進(jìn)展。Oct-4基因既能

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