本文關(guān)鍵詞：抗腸炎沙門氏菌單鏈抗體制備及其特異性分析

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【摘要】：目的:利用基因工程技術(shù)制備抗腸炎沙門氏菌的單鏈抗體。方法:從抗腸炎沙門氏菌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞中純化RNA,反轉(zhuǎn)錄后擴(kuò)增出抗體的重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)基因片段,采用重疊延伸的方法,用柔性多肽Linker接頭(Gly4Ser)3按VL-Linker-VH方式將VH基因和VL基因拼接成單鏈抗體基因片段后,連接到pGEX-4T-1載體上,進(jìn)行重組轉(zhuǎn)化。挑取陽(yáng)性克隆,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,通過(guò)GST柱進(jìn)行親和層析,最后利用ELISA檢測(cè)抗體的活性。結(jié)果:成功構(gòu)建了表達(dá)抗腸炎沙門氏菌單鏈抗體的基因工程菌株,經(jīng)SDS-PAGE和ELISA檢測(cè)結(jié)果表明,誘導(dǎo)表達(dá)的單鏈抗體scFv分子量約為60 kDa,其能特異與腸炎沙門氏菌結(jié)合,但與副甲傷寒沙門氏菌、鴨沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌有輕度交叉反應(yīng)。結(jié)論:成功構(gòu)建了抗腸炎沙門氏菌單鏈抗體的表達(dá)菌株,表達(dá)的單鏈抗體scFv可作為沙門氏菌的檢測(cè)的候選抗體分子。
【作者單位】： 南昌大學(xué)生命科學(xué)與食品工程學(xué)院中德聯(lián)合研究院;江西中醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部;
【關(guān)鍵詞】： 沙門氏菌 單鏈抗體 重鏈可變區(qū) 輕鏈可變區(qū)
【基金】：“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃(2011BAK10B06、2011BAK10B01、2011BAK10B02) 國(guó)家自然科學(xué)基金(31000048、31170091、31260363、81160494) 食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室目標(biāo)導(dǎo)向課題(SKLF-MB-201002) 自由探索課題(SKLF-TS-200916) 贛鄱英才555工程人才計(jì)劃(2012年)資助項(xiàng)目
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 沙門氏菌是一種重要的食源性致病菌,廣泛分布于自然界,至今已有2 523種血清型被發(fā)現(xiàn)[1],可引起人類傷寒、副傷寒和食物中毒等許多疾病,直接影響工農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)發(fā)展,使全球遭受巨大的經(jīng)濟(jì)損失。國(guó)內(nèi)外沙門氏菌食物中毒多年來(lái)一直位居細(xì)菌性食物中毒的首位[2]。在中國(guó)細(xì)菌性食

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 秦麗莉;張春明;;單鏈抗體研究進(jìn)展及其在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(放射醫(yī)學(xué)核醫(yī)學(xué)分冊(cè));2005年06期

2 趙貴,張華;畜產(chǎn)品中沙門氏菌的危害及檢測(cè)方法概述[J];貴州畜牧獸醫(yī);2004年03期

3 石凌超;韓紅輝;唐U單，

本文編號(hào)：618348