本文關鍵詞：抗腸炎沙門氏菌單鏈抗體制備及其特異性分析

  更多相關文章： 沙門氏菌 單鏈抗體 重鏈可變區(qū) 輕鏈可變區(qū)

【摘要】：目的:利用基因工程技術制備抗腸炎沙門氏菌的單鏈抗體。方法:從抗腸炎沙門氏菌單克隆抗體的雜交瘤細胞中純化RNA,反轉(zhuǎn)錄后擴增出抗體的重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)基因片段,采用重疊延伸的方法,用柔性多肽Linker接頭(Gly4Ser)3按VL-Linker-VH方式將VH基因和VL基因拼接成單鏈抗體基因片段后,連接到pGEX-4T-1載體上,進行重組轉(zhuǎn)化。挑取陽性克隆,經(jīng)IPTG誘導后,通過GST柱進行親和層析,最后利用ELISA檢測抗體的活性。結(jié)果:成功構建了表達抗腸炎沙門氏菌單鏈抗體的基因工程菌株,經(jīng)SDS-PAGE和ELISA檢測結(jié)果表明,誘導表達的單鏈抗體scFv分子量約為60 kDa,其能特異與腸炎沙門氏菌結(jié)合,但與副甲傷寒沙門氏菌、鴨沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌有輕度交叉反應。結(jié)論:成功構建了抗腸炎沙門氏菌單鏈抗體的表達菌株,表達的單鏈抗體scFv可作為沙門氏菌的檢測的候選抗體分子。
【作者單位】： 南昌大學生命科學與食品工程學院中德聯(lián)合研究院;江西中醫(yī)學院基礎醫(yī)學部;
【關鍵詞】： 沙門氏菌 單鏈抗體 重鏈可變區(qū) 輕鏈可變區(qū)
【基金】：“十二五”國家科技支撐計劃(2011BAK10B06、2011BAK10B01、2011BAK10B02) 國家自然科學基金(31000048、31170091、31260363、81160494) 食品科學與技術國家重點實驗室目標導向課題(SKLF-MB-201002) 自由探索課題(SKLF-TS-200916) 贛鄱英才555工程人才計劃(2012年)資助項目
【分類號】：R392
【正文快照】： 沙門氏菌是一種重要的食源性致病菌,廣泛分布于自然界,至今已有2 523種血清型被發(fā)現(xiàn)[1],可引起人類傷寒、副傷寒和食物中毒等許多疾病,直接影響工農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)發(fā)展,使全球遭受巨大的經(jīng)濟損失。國內(nèi)外沙門氏菌食物中毒多年來一直位居細菌性食物中毒的首位[2]。在中國細菌性食

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 秦麗莉;張春明;;單鏈抗體研究進展及其在醫(yī)學中的應用[J];國外醫(yī)學(放射醫(yī)學核醫(yī)學分冊);2005年06期

2 趙貴,張華;畜產(chǎn)品中沙門氏菌的危害及檢測方法概述[J];貴州畜牧獸醫(yī);2004年03期

3 石凌超;韓紅輝;唐U單，

本文編號：618348