本文關(guān)鍵詞：小鼠CD40分子胞外段基因的克隆、原核表達(dá)及活性鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建含小鼠CD40(mCD40)分子胞外段序列的原核表達(dá)載體,在大腸桿菌中表達(dá),并對(duì)mCD40/GST融合蛋白進(jìn)行純化和抗原活性鑒定。方法從小鼠DC2.4細(xì)胞系中擴(kuò)增目的基因mCD40并克隆至原核表達(dá)載體pGEX-6P-1,構(gòu)建重組表達(dá)載體pGEX-6P-1-mCD40,并將該載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)mCD40/GST融合蛋白,并采用GST瓊脂糖凝膠純化重組蛋白。純化后的重組蛋白經(jīng)Western blot法、間接ELISA鑒定其抗原活性。結(jié)果 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)測(cè)序分析與GenBank公布的小鼠CD40胞外段序列一致;重組表達(dá)載體經(jīng)酶切鑒定正確;IPTG誘導(dǎo)后經(jīng)SDS-PAGE分析證實(shí)得到了相對(duì)分子質(zhì)量(M r)為45 000的重組蛋白;Western blot法和ELISA檢測(cè)證實(shí)純化的mCD40/GST蛋白能夠與特異性抗體發(fā)生反應(yīng)。結(jié)論成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體pGEX-6P-1-mCD40,利用原核表達(dá)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了mCD40/GST融合蛋白的可溶性表達(dá)并證明其具有較高的抗原活性。
【作者單位】： 解放軍總醫(yī)院泌尿外科;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所;新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： CD 原核表達(dá) 蛋白純化 活性檢測(cè)
【基金】：國家自然科學(xué)基金(30840094) 國家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863)(2007AA02Z451)
【分類號(hào)】：R392.11
【正文快照】： CD40是一個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)48 000的跨膜糖蛋白細(xì)胞表面受體,屬于腫瘤壞死因子(tumor necrosisfactor,TNF)受體超家族成員。最初被發(fā)現(xiàn)于B淋巴細(xì)胞,并證明可以誘導(dǎo)B細(xì)胞分化增殖[1-2],隨后研究證實(shí)CD40同時(shí)也表達(dá)于單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞(dendritic cells,DC)以及其他一些非造

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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6 宋振;王R，

本文編號(hào)：600249