本文關(guān)鍵詞：抗TRPC6多肽單克隆抗體的制備及其識(shí)別抗原表位分析

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【摘要】：目的:制備抗TRPC6多肽單克降抗體,并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定。方法:采用TRPC6多肽偶聯(lián)血藍(lán)蛋白(KLH)為抗原,免疫小鼠后經(jīng)細(xì)胞融合,間接ELISA法篩選陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞;單克隆抗體亞類檢測(cè)試劑盒鑒定Ig亞型;間接ELISA法鑒定該單克隆抗體的特性、效價(jià)及其相對(duì)親和力;采用生物信息學(xué)進(jìn)行抗原表位預(yù)測(cè),并通過(guò)ELISA單抗相加試驗(yàn)分析單抗識(shí)別抗原位點(diǎn)的差異性。結(jié)果:獲得3株能穩(wěn)定分泌抗TRPC6多肽的單抗雜交瘤細(xì)胞株,分別命名為A2、F11和H8;抗體Ig亞類均為IgG1型;染色體鑒定符合雜交瘤細(xì)胞的特性;3株單抗相對(duì)親和力比較F11較強(qiáng),A2和H8接近;抗體識(shí)別位點(diǎn)分析結(jié)果表明A2與H8、A2與F11的相加指數(shù)分別大于50%,可能識(shí)別的是不同位點(diǎn);而F11與H8的相加指數(shù)小于50%,可能識(shí)別的是同一位點(diǎn)。結(jié)論:抗TRPC6多肽單克隆抗體的成功制備及其識(shí)別抗原表位分析,為TRPC6蛋白的相關(guān)研究提供物質(zhì)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 廣東藥學(xué)院微生物學(xué)與免疫學(xué)教研室;廣州醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸疾病國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中山寶元生物工程有限公司;中山市博愛(ài)醫(yī)院腎內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： TRPC 單克隆抗體 抗原表位
【基金】：華南中醫(yī)藥城項(xiàng)目(20101H014) 中山市科技計(jì)劃項(xiàng)目(20102A021)資助
【分類號(hào)】：R392-33
【正文快照】： 瞬時(shí)受體電位陽(yáng)離子通道蛋白6(Transient re-ceptor potential channel,TRPC6)是瞬時(shí)受體電位陽(yáng)離子通道(TRPC)一個(gè)亞群,Winn等2005年首次報(bào)道TRPC6通道位于腎小球足細(xì)胞,是裂隙膜的重要組成部分,編碼足細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白,其表達(dá)量的改變可導(dǎo)致大量蛋白尿,從而引起局灶節(jié)段性腎小球

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