本文關鍵詞：慢病毒載體轉錄通讀率檢測方法的建立

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【摘要】：慢病毒載體作為一種有效的生物研究和基因治療載體,近年來正受到廣泛關注,而轉錄通讀現(xiàn)象則是限制其被使用的主要生物安全性瓶頸之一。為了評估慢病毒載體在整合入染色體后的轉錄通讀的實際情況,需要建立一種有效的檢測轉錄通讀率的方法。文中運用分子生物學等手段,將相關質粒瞬時轉染入293T細胞,模擬野生型和自滅活型慢病毒載體整合入染色體后的情況,利用實時熒光定量PCR分別定量轉錄通讀和總轉錄本在慢病毒載體上的特征序列,并計算出轉錄通讀率;同時使用流式細胞計數(shù)等技術,檢測轉錄通讀后的GFP蛋白產物。兩種檢測結果均與理論相符,即自滅活型載體具有更高的轉錄通讀率。說明文中所建立的方法有效可靠,為進一步評估和降低慢病毒載體的轉錄通讀率,提高慢病毒載體的生物安全性的研究提供技術支持。
【作者單位】： 上海市兒童醫(yī)院上海交通大學附屬兒童醫(yī)院;上海交通大學醫(yī)學遺傳研究所;衛(wèi)生部醫(yī)學胚胎分子生物學重點實驗室暨上海市胚胎與生殖工程重點實驗室;
【關鍵詞】： 慢病毒載體 自滅活慢病毒載體 轉錄通讀率 安全性
【基金】：國家自然科學基金(No.81271690) 國家重大基礎研究發(fā)展計劃(973計劃)(No.2010CB945202) 上海市自然科學基金(No.11ZR1429900)資助~~
【分類號】：R346
【正文快照】： 轉錄通讀(Read-through)是指RNA聚合酶復合物在轉錄過程中遇到轉錄終止信號(如AAUAAA signal)時不能被正常終止,而是讀過終止信號繼續(xù)轉錄下游DNA序列的現(xiàn)象(圖1)。它經常發(fā)生在病毒或病毒載體基因的轉錄過程中。目前廣泛使用的第3代慢病毒載體經過了自滅活改造(刪除U3啟動子)

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本文編號：598633