本文關(guān)鍵詞：人前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9的cDNA克隆和表達(dá)及多克隆抗體的制備

  更多相關(guān)文章： pcsk 表達(dá)載體 誘導(dǎo)表達(dá) 多克隆抗體

【摘要】：目的構(gòu)建人前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9(pcsk9)的原核表達(dá)載體并誘導(dǎo)其表達(dá),制備其蛋白的多克隆抗體。方法聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增人工合成的pcsk9 cDNA序列;擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)TA克隆、雙酶切、連接,構(gòu)建pET-28b-pcsk9表達(dá)載體;將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌表達(dá)菌BL21(DE3)的感受態(tài)細(xì)胞中,誘導(dǎo)表達(dá);用純化檢測(cè)過(guò)的目的蛋白免疫新西蘭兔,最后采集全血收集血清,獲得多克隆抗體,并對(duì)該抗體進(jìn)行免疫印跡及效價(jià)測(cè)定。結(jié)果 PET-28b-pcsk9原核表達(dá)載體構(gòu)建成功,用誘導(dǎo)表達(dá)的目的蛋白免疫動(dòng)物,收集血清獲得多克隆抗體。對(duì)多克隆抗體進(jìn)行純化,免疫印跡檢測(cè)結(jié)果證明自制多克隆抗體特異性良好,效價(jià)測(cè)定為1:13 200。結(jié)論成功構(gòu)建了pcsk9原核表達(dá)載體pET-28b-pcsk9,且獲得了其蛋白的多克隆抗體。
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【關(guān)鍵詞】： pcsk 表達(dá)載體 誘導(dǎo)表達(dá) 多克隆抗體
【基金】：廣州市教育局市屬高校科研項(xiàng)目(10A259) 廣州市屬高校教學(xué)團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(穗教高教2012-16號(hào))
【分類(lèi)號(hào)】：R392.11
【正文快照】： 高膽固醇血癥是目前威脅現(xiàn)代人類(lèi)健康的一大疾病,是環(huán)境、遺傳等多因素相互作用引起的復(fù)雜性疾�、拧Ｑ獫{中低密度脂蛋白膽固醇(low densitylipoprptein cholesterol,LDL-C)水平的異常升高是其發(fā)生的最主要原因,所以合理地控制LDL-C的血漿水平則是預(yù)防和治療此病的關(guān)鍵所在。

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