本文關(guān)鍵詞：乙型肝炎病毒腫瘤蛋白細(xì)胞靶標(biāo)HBXIP負(fù)向調(diào)控Toll樣受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： Toll樣受體4 HBXIP 自噬溶酶體 轉(zhuǎn)錄因子EB

【摘要】：目的：研究HBXIP在LPS誘導(dǎo)的TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中發(fā)揮的作用；闡明HBXIP在TLR4轉(zhuǎn)運(yùn)和降解過(guò)程中的重要作用及其機(jī)制。方法：1.構(gòu)建pcmv-mHBXIP真核表達(dá)質(zhì)粒,并測(cè)序鑒定。2.定量PCR與Western blot的方法檢測(cè)HBXIP的表達(dá)規(guī)律,分析LPS刺激下HBXIP的表達(dá)變化。3.以小鼠巨噬細(xì)胞系Raw264.7為細(xì)胞模型,建立HBXIP高表達(dá)和表達(dá)抑制的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系,用定量PCR和Western blot的方法鑒定HBXIP高表達(dá)和表達(dá)抑制的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。4.用定量PCR和ELISA方法檢HBXIP高表達(dá)的Raw264.7細(xì)胞系以及HBXIP表達(dá)抑制的Raw264.7細(xì)胞系中IL-6、IL-1β、TNF-β等炎癥因子的表達(dá)情況；用Western blot的方法檢測(cè)LPS誘導(dǎo)下NF-κB信號(hào)通路以及MAPKs信號(hào)通路的變化(包括KKα/β、IκBα、p65、JNK、Erk、p38、IRF3等)。5.通過(guò)免疫共沉淀的方法,檢測(cè)HBXIP和TLR4的直接作用；通過(guò)FACS分析巨噬細(xì)胞表面TLR4的表達(dá)變化；通過(guò)Western blot的方法檢測(cè)TLR4蛋白水平,用定量PCR檢測(cè)TLR4的轉(zhuǎn)錄水平變化。6.通過(guò)Western blot的方法檢測(cè)HBXIP高表達(dá)的Raw264.7細(xì)胞系以及HBXIP表達(dá)抑制的Raw264.7細(xì)胞系中LC3Ⅱ的表達(dá)情況以及mTOR信號(hào)通路的變化。7.采用流式細(xì)胞術(shù)分析HBXIP對(duì)巨噬細(xì)胞溶酶體數(shù)量以及溶酶體pH的影響。8.利用激光共聚焦,定位分析HBXIP高表達(dá)的Raw264.7細(xì)胞系以及HBXIP表達(dá)抑制的Raw264.7細(xì)胞系中TLR4與溶酶體以及自噬小體的共定位。9. Western blot方法檢測(cè)HBXIP對(duì)巨噬細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子EB (transcription factor EB, TEFB)的磷酸化水平的影響；利用激光共聚焦分析HBXIP對(duì)TFEB核轉(zhuǎn)位的影響。10.電鏡觀(guān)察HBXIP高表達(dá)和表達(dá)抑制的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系中溶酶體的形態(tài)。11.用TFEB siRNA, Rab7 siRNA, mTORCl的激動(dòng)劑Cycloheximide(CHX),溶酶體活性抑制劑Chloroquine diphosphate (CQ),自噬溶酶體融合抑制劑Vinblastine處理巨噬細(xì)胞,Western blot方法檢測(cè)HBXIP對(duì)TLR4蛋白水平的影響。結(jié)果：1. HBXIP在LPS的刺激下呈現(xiàn)時(shí)間依賴(lài)性。2. HBXIP能夠使IL-6、IL-1β、TNF-α、IFN-β等促炎因子的表達(dá)顯著下調(diào),HBXIP能減弱LPS誘導(dǎo)下NF-κB信號(hào)通路以及MAPKs信號(hào)通路的磷酸化。3. HBXIP對(duì)TLR4的蛋白水平有靶向調(diào)控作用,HBXIP過(guò)表達(dá)能夠顯著抑制TLR4的蛋白表達(dá)。4. HBXIP過(guò)表達(dá)能促進(jìn)LC3Ⅱ的表達(dá),抑制mTOR信號(hào)通路的相關(guān)蛋白的表達(dá)水平,促進(jìn)細(xì)胞自噬。5. HBXIP過(guò)表達(dá)能減少TFEB的磷酸化水平,促進(jìn)其核轉(zhuǎn)位,從而影響溶酶體的數(shù)量和功能。過(guò)表達(dá)HBXIP后,再用自噬溶酶體相關(guān)抑制劑處理,HBXIP對(duì)TLR4的下調(diào)作用消失。結(jié)論：HBXIP通過(guò)促進(jìn)轉(zhuǎn)錄因子TFEB的活化,提高了溶酶體以及自噬溶酶體的活性,促進(jìn)TLR4的內(nèi)吞和降解,抑制了LPS誘導(dǎo)的IL-6, IL-1β, TNF-α以及IFN-β炎癥因子的分泌。我們認(rèn)為HBXIP是一個(gè)新的TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)向調(diào)控分子。
【關(guān)鍵詞】：Toll樣受體4 HBXIP 自噬溶酶體 轉(zhuǎn)錄因子EB
【學(xué)位授予單位】：杭州師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R373.21
【目錄】：

• 致謝5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 縮略詞表11-14
• 1. 緒論14-17
• 2. 材料和方法17-30
• 2.1 材料17-22
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法22-30
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-53
• 3.1 mHBXIP的全長(zhǎng)克隆30
• 3.2 HBXIP能被LPS誘導(dǎo)產(chǎn)生30-31
• 3.3 HBXIP調(diào)節(jié)TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究31-37
• 3.4 HBXIP抑制TLR4的表達(dá)37-39
• 3.5 HBXIP對(duì)自噬的影響39-41
• 3.6 HBXIP對(duì)溶酶體的影響41-47
• 3.7 HBXIP促進(jìn)TLR4轉(zhuǎn)移到自噬溶酶體47-53
• 4. 討論53-56
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 綜述60-74
• 參考文獻(xiàn)68-74
• 作者簡(jiǎn)介74

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1 周世恭;;植物的溶酶體系統(tǒng)[J];植物雜志;1988年04期

2 左芳;許超;陳銘德;;探究草履蟲(chóng)溶酶體內(nèi)pH的科技實(shí)驗(yàn)活動(dòng)[J];生物學(xué)教學(xué);2010年03期

3 顧清嫻;;溶酶體與細(xì)胞內(nèi)吞作用[J];生物學(xué)教學(xué);1990年01期

4 孫敬三;;植物細(xì)胞——第九講 溶酶體、過(guò)氧化物體和乙醛酸循環(huán)體[J];植物雜志;1979年02期

5 李莉，石玉秀;線(xiàn)狀溶酶體及其細(xì)胞生物學(xué)特性[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;1995年02期

6 張磊;陽(yáng)宇;吳傳芳;;一種新型的通過(guò)免疫富集純化溶酶體方法[J];中國(guó)生物工程雜志;2013年11期

7 羅深秋;肖煥才;樸英杰;酒井真弘;小川和朗;;線(xiàn)狀溶酶體的電鏡細(xì)胞化學(xué)觀(guān)察[J];中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;1992年01期

8 郭曉強(qiáng);;一位生物化學(xué)家的細(xì)胞之旅——德迪夫與溶酶體發(fā)現(xiàn)[J];科學(xué);2014年03期

9 張過(guò)江，王嘉，，姚軍蘭，劉曉麒;關(guān)于吖啶橙測(cè)定溶酶體H~＋－ATPase轉(zhuǎn)運(yùn)H~＋的研究[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;1994年06期

10 黃巨恩;;關(guān)于動(dòng)物機(jī)體細(xì)胞溶酶體起源的探討[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(社會(huì)科學(xué)版);2006年S1期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 蘇黎;崔宗杰;;溶酶體可作為可重建性鈣庫(kù)調(diào)節(jié)胞漿鈣信號(hào)的產(chǎn)生[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2005年學(xué)術(shù)大會(huì)、青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

2 龍鼎新;伍一軍;;神經(jīng)病靶酯酶的自噬-溶酶體途徑降解研究[A];中國(guó)毒理學(xué)會(huì)生化與分子毒理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第六屆全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議、中國(guó)毒理學(xué)會(huì)遺傳毒理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第五屆全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議、廣東省預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)衛(wèi)生毒理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議、廣東省環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

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4 李柱;吳淑琪;韓家淮;韓守法;;含有酸激發(fā)羅丹明衍生物的pH探針用于溶酶體酸度的研究[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第28屆學(xué)術(shù)年會(huì)第3分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2012年

5 易靜;張蕙心;張嵐;湯雪明;;溶酶體在垂體-腎上腺皮質(zhì)激素分泌調(diào)節(jié)中的作用[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第五次會(huì)議論文摘要匯編[C];1992年

6 肖義;于海波;王璐;葉智偉;張新富;;溶酶體定位的熒光分子探針[A];第八屆全國(guó)化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2013年

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1 葉盛楠;北京協(xié)和醫(yī)院兒科成功繪制我國(guó)溶酶體疾病譜[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2014年

2 ;耶魯大學(xué)科學(xué)家解釋細(xì)胞防護(hù)機(jī)制[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2001年

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1 李艷艷;槲皮素對(duì)溶酶體活性鐵介導(dǎo)的酒精性肝損傷及自噬功能紊亂的拮抗效應(yīng)[D];華中科技大學(xué);2015年

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3 王璐;靶向細(xì)胞溶酶體或染色質(zhì)的粘度熒光探針[D];大連理工大學(xué);2014年

4 劉波;乙型肝炎病毒通過(guò)干擾溶酶體成熟抑制細(xì)胞自噬性降解途徑[D];浙江大學(xué);2013年

5 黃娟;細(xì)胞毒性腦水腫的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中AQP4內(nèi)化和溶酶體分選現(xiàn)象及其機(jī)制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

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1 王浩;布魯氏菌侵染巨噬細(xì)胞后對(duì)自噬—溶酶體降解途徑的影響[D];石河子大學(xué);2015年

2 孟素芳;溶酶體在鎘誘導(dǎo)WRL-68細(xì)胞自噬過(guò)程中作用的研究[D];南京師范大學(xué);2015年

3 鄭邦旭;星形膠質(zhì)細(xì)胞溶酶體與β-淀粉樣蛋白的相互作用機(jī)制研究[D];寧波大學(xué);2015年

4 賈盼盼;Hsf4對(duì)溶酶體活性的調(diào)控[D];河南大學(xué);2015年

5 莊寧彤;乙型肝炎病毒腫瘤蛋白細(xì)胞靶標(biāo)HBXIP負(fù)向調(diào)控Toll樣受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的機(jī)制研究[D];杭州師范大學(xué);2016年

6 聶斯;靶向半胱氨酸組織蛋白酶家族的溶酶體探針的研究[D];華中科技大學(xué);2012年

7 王婧熠;碳納米管在神經(jīng)細(xì)胞溶酶體與細(xì)胞膜交換中對(duì)鈣離子平衡的影響[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2013年

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9 郭培霞;質(zhì)子泵抑制劑對(duì)羥基氯喹治療SLE的干擾作用機(jī)制[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

本文編號(hào)：589006