本文關(guān)鍵詞：樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗聯(lián)合百白破疫苗對(duì)哺乳動(dòng)物乳腺癌模型細(xì)胞治療的研究

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【摘要】：癌癥是一種致命性的疾病,由于癌細(xì)胞的無(wú)限增殖以及癌細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)移使癌癥成為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一大難題。乳腺癌是一種發(fā)生率較高的女性疾病,發(fā)生部位為乳腺腺上皮組織,是一種比較普遍的惡性腫瘤,而且對(duì)女性群體的身心健康有著很大的影響。由于乳腺癌細(xì)胞之間的粘著性降低,使得其高分散、高轉(zhuǎn)移,其正常細(xì)胞的特性被破壞。近年來(lái),乳腺癌在全球的發(fā)病率迅速增長(zhǎng)、死亡率明顯升高,使得全球各個(gè)國(guó)家高度重視乳腺癌所帶來(lái)的巨大影響,因此針對(duì)該病進(jìn)行有效的治療己成為科研工作者比較重視的課題。樹(shù)突狀細(xì)胞具有攝取抗原的能力,同時(shí)也可以加工抗原。樹(shù)突狀細(xì)胞可以將抗原提呈到T細(xì)胞的表面,然后誘導(dǎo)T細(xì)胞免疫應(yīng)答。樹(shù)突狀細(xì)胞的抗原遞呈能力是最強(qiáng)大的。DCs疫苗首先是把單核細(xì)胞在體外培養(yǎng),加入各種各種細(xì)胞因子誘導(dǎo)成DCs,然后將DCs負(fù)載上相應(yīng)的腫瘤抗原之后就制成DCs疫苗。注射DCs疫苗可以治療腫瘤,腫瘤殺傷性淋巴細(xì)胞可以被DCs疫苗激活,并且大量增殖,從而監(jiān)視體內(nèi)的微環(huán)境、殺傷腫瘤細(xì)胞。目前體外大批量擴(kuò)增DCs以及制備DCs疫苗技術(shù)的逐漸成熟。將DCs疫苗應(yīng)用于腫瘤治療是一項(xiàng)極有發(fā)展?jié)摿Φ姆椒?DCs疫苗在生物免疫治療領(lǐng)域獲得了較高的關(guān)注,逐漸成為焦點(diǎn)。DCs疫苗可以增強(qiáng)病人的免疫系統(tǒng),DCs疫苗也能調(diào)控免疫反應(yīng),因此作為免疫療法治療癌癥的免疫療法。隧DCs生物學(xué)及功能學(xué)研究的進(jìn)步推動(dòng)DCs疫苗在治療癌癥方面的發(fā)展。DC是骨髓細(xì)胞在細(xì)胞因子rmGM-CSF和rmIL-4的誘導(dǎo)下形成的。DCs前體細(xì)胞在rmGM-CSF的誘導(dǎo)下慢慢地向DCs方向分化、向DCs方向增殖。在GM-CSF的誘導(dǎo)下,DCs前體細(xì)胞逐漸地分化、增殖成為DCs集落。rmIL-4抑制細(xì)胞向巨噬細(xì)胞方向分化。rmTNF-α可以使不成熟的DCs轉(zhuǎn)化為成熟的DCs。DCs疫苗注射到體內(nèi)后,可以使產(chǎn)生大量的細(xì)胞因子如IL-12,激發(fā)免疫應(yīng)答。免疫佐劑具有非特異性,是一種免疫增生劑。將免疫佐劑自身不具有抗原性,預(yù)先注射到體內(nèi)或者和抗原一起注射到體內(nèi)之后,可以使免疫反應(yīng)的類型發(fā)生改變或者使免疫原性增強(qiáng)。研究表明,免疫佐劑可以提高DCs的免疫應(yīng)答,也可以增強(qiáng)記憶性免疫。DCs扮演免疫系統(tǒng)的哨兵的角色,通過(guò)監(jiān)督免疫環(huán)境和抗原識(shí)別。DCs可以被免疫環(huán)境中的危險(xiǎn)信號(hào)激活,DCs接觸抗原以后,通過(guò)血管遷移至淋巴結(jié),參與T細(xì)胞免疫應(yīng)答。部分免疫佐劑能夠提高有機(jī)體的免疫水平,通過(guò)大量分泌細(xì)胞因子。百白破疫苗可以預(yù)防一下三種疾病——破傷風(fēng)、白喉、百日咳。它是由百日咳、白喉、破傷風(fēng)組成的脫毒疫苗,是這三種類毒素按照一定的比例配制成的。本試驗(yàn)使用的免疫佐劑是吸附無(wú)細(xì)胞百白破疫苗(ADPT)。腫瘤生物免疫療法,DCs腫瘤疫苗是一種開(kāi)啟了新型的腫瘤免疫之門,DCs免疫療法是一種發(fā)展?jié)摿薮鬅o(wú)比的腫瘤治療方案。國(guó)內(nèi)外將DCs疫苗用于乳腺腫瘤治療的研究并不多見(jiàn),尤其針對(duì)乳腺癌的早期治療。本實(shí)驗(yàn)使用的細(xì)胞系為4T1小鼠乳腺癌細(xì)胞株,將其接種在BALB/c小鼠的右側(cè)乳房墊以建立腫瘤模型,體外將骨髓來(lái)源的單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)成DCs,再加入腫瘤抗原裂解物使DCs負(fù)載上抗原,促進(jìn)DCs成熟。觀察DCs疫苗對(duì)小鼠乳腺癌的治療效果。同時(shí)進(jìn)一步了解聯(lián)合免疫佐劑使用的抑瘤效果,以及注射吸附無(wú)細(xì)胞百白破疫苗產(chǎn)生免疫記憶的小鼠聯(lián)合DCs疫苗使用對(duì)乳腺癌的治療效果。本研究中,我們無(wú)菌取小鼠骨髓細(xì)胞,通過(guò)加入細(xì)胞因子體外培養(yǎng)誘導(dǎo)成樹(shù)突狀細(xì)胞,并用加入腫瘤抗原裂解物使DCs負(fù)載上抗原,促進(jìn)DCs成熟。將4T1乳腺癌細(xì)胞皮下注射到BALB/c小鼠乳房墊即原位注射,建立乳腺癌腫瘤模型,并隨機(jī)地把30只接種4T1細(xì)胞的BALB/c小鼠分成六組：PBS組、DCs疫苗組、ADPT組、DCs疫苗+ADPT實(shí)時(shí)組、ADPT回憶應(yīng)答組、DCs疫苗+ADPT回憶應(yīng)答組。一方面,我們檢測(cè)百白破疫苗聯(lián)合DCs疫苗是否比單純使用DCs疫苗對(duì)乳腺癌是否有治療效果。另一方面,我們提前給荷瘤小鼠注射百白破疫苗,使小鼠體內(nèi)形成免疫記憶,再次對(duì)已經(jīng)免疫過(guò)的小鼠接種ADPT聯(lián)合DCs疫苗,觀察其是否比單純使用DCs疫苗以及使ADPT聯(lián)合DCs疫苗實(shí)時(shí)治療效果更佳。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,無(wú)論是否提前注射ADPT,單獨(dú)使用DCs疫苗都比單獨(dú)使用ADPT對(duì)于乳腺癌的治療效果更好。同時(shí),百白破疫苗與DCs疫苗在抗腫瘤免疫中有正協(xié)同作用。ADPT聯(lián)合DCs疫苗對(duì)小鼠乳腺癌有顯著的作用,其治療效果明顯優(yōu)于單獨(dú)使用DCs疫苗或者單獨(dú)使用ADPT。而提前注射ADPT后使小鼠產(chǎn)生免疫記憶后,再聯(lián)合DCs疫苗對(duì)小鼠乳腺癌治療效果最佳。本試驗(yàn)為早期乳腺癌的治療提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和依據(jù),對(duì)腫瘤病情的發(fā)展有很大的技術(shù)支持。同時(shí),對(duì)于腫瘤生物免疫治療領(lǐng)域在臨床方面的應(yīng)用奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),并且可以為臨床乳腺癌治療提供了多元性綜合治療的思路。
【關(guān)鍵詞】：乳腺癌 DCs疫苗 生物免疫治療 百白破疫苗
【學(xué)位授予單位】：安徽大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9;R-332
【目錄】：

• 摘要3-6
• Abstract6-11
• 前言11-21
• 一、乳腺癌11-13
• 1、乳腺癌概述11-12
• 2、乳腺癌細(xì)胞4T112-13
• 二、DCs疫苗13-18
• 1、DCs疫苗的發(fā)展史13
• 2、樹(shù)突狀細(xì)胞13-14
• 3、致敏DCs14-15
• 4、DCs成熟15
• 5、DCs疫苗抗腫瘤的機(jī)制15-18
• 三、吸附無(wú)細(xì)胞百白破疫苗18-19
• 四、國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展及選題思路19-21
• 1、國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展19
• 2、國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展與存在的問(wèn)題及設(shè)計(jì)思路19-21
• 材料方法21-34
• 一、主要試劑21
• 二、主要試劑的配制21-22
• 三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物22
• 四、實(shí)驗(yàn)耗材22-23
• 五、主要設(shè)備和器材23-24
• 六、實(shí)驗(yàn)方法24-33
• 6.1 細(xì)胞培養(yǎng)傳代與凍存24-26
• 6.1.1 細(xì)胞的復(fù)蘇24
• 6.1.2 細(xì)胞培養(yǎng)24-25
• 6.1.3 細(xì)胞凍存25-26
• 6.1.4 臺(tái)盼藍(lán)染色及細(xì)胞計(jì)數(shù)26
• 6.2 腫瘤抗原裂解液的制備26-27
• 6.3 骨髓來(lái)源樹(shù)突狀細(xì)胞的提取27-29
• 6.4 檢測(cè)小鼠骨髓來(lái)源的DCs IL-12水平29
• 6.5 DCs疫苗的復(fù)蘇29-30
• 6.6 構(gòu)建乳腺癌種瘤模型30
• 6.7 DCs疫苗聯(lián)合ADPT對(duì)小鼠乳腺癌的治療效果30-33
• 6.7.1 收集小鼠血清31
• 6.7.2 檢測(cè)血清中IL-4的表達(dá)水平31
• 6.7.3 檢測(cè)血清中IFN-γ的表達(dá)水平31
• 6.7.4 測(cè)量腫瘤體積31
• 6.7.5 測(cè)量腫瘤質(zhì)量31-33
• 實(shí)驗(yàn)流程圖33-34
• 結(jié)果34-49
• 一、4T1細(xì)胞形態(tài)學(xué)34
• 二、DCs形態(tài)學(xué)34-36
• 三、小鼠骨髓來(lái)源的DCsIL-12水平36
• 四、4T1乳腺癌模型36-38
• 五、乳腺癌免疫治療結(jié)果38-49
• 5.1 DCs疫苗聯(lián)合ADPT對(duì)小鼠血清IL-4水平的影響38-40
• 5.1.1 DCs疫苗聯(lián)合ADPT對(duì)各組小鼠血清IL-4水平的影響38-39
• 5.1.2 DCs疫苗聯(lián)合ADPT與DCs疫苗組小鼠血清IL-4水平的比較39-40
• 5.2 DCs疫苗聯(lián)合ADPT對(duì)小鼠血清IFN-γ水平的影響40-43
• 5.2.1 DCs疫苗聯(lián)合ADPT對(duì)各組小鼠血清IFN-γ水平的影響40-42
• 5.2.2 DCs疫苗聯(lián)合ADPT與DCs疫苗組小鼠血清IFN-γ水平的比較42-43
• 5.3 DCs疫苗聯(lián)合ADPT對(duì)小鼠腫瘤體積的影響43-45
• 5.3.1 DCs疫苗聯(lián)合ADPT對(duì)各組小鼠腫瘤體積的影響43-45
• 5.4 DCs疫苗聯(lián)合ADPT對(duì)小鼠腫瘤質(zhì)量的影響45-49
• 5.4.1 DCs疫苗聯(lián)合ADPT對(duì)各組小鼠腫瘤質(zhì)量的影響45-47
• 5.4.2 DCs疫苗聯(lián)合ADPT與DCs疫苗組小鼠腫瘤質(zhì)量的比較47-49
• 討論49-51
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 致謝55-57
• 附錄57

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本文編號(hào)：583652