本文關(guān)鍵詞：犬惡絲蟲酪蛋白激酶2β亞基基因片段的克隆和原核表達

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【摘要】：目的對犬惡絲蟲酪蛋白激酶2β亞基(Csnk2b)部分基因片段進行克隆、原核表達及免疫反應(yīng)性分析。方法根據(jù)犬惡絲蟲cDNA文庫中篩選出的Csnk2b部分基因片段設(shè)計引物,以含有插入Csnk2b部分基因片段的噬菌體DNA為模板,進行PCR擴增。產(chǎn)物亞克隆至原核表達載體,構(gòu)建重組載體pGEX-4T-1-Csnk2b,雙酶切鑒定。將其轉(zhuǎn)入大腸埃希菌(E.coli)Rosetta(DE3)中,異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達,通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析表達的重組蛋白,蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)以小鼠抗犬惡絲蟲陽性血清為一抗,分析重組蛋白免疫反應(yīng)性。結(jié)果Csnk2b部分基因片段PCR擴增產(chǎn)物約為700 bp,測序結(jié)果與cDNA文庫中篩選得到的序列一致。重組表達載體pGEX-4T-1-Csnk2b雙酶切鑒定正確。SDS-PAGE結(jié)果顯示,IPTG誘導(dǎo)后重組蛋白GST-Csnk2b表達,相對分子質(zhì)量(M r)約為45 000,與預(yù)期大小一致。Western blotting分析表明,重組蛋白能被小鼠抗犬惡絲蟲陽性血清識別。結(jié)論克隆并表達了犬惡絲蟲Csnk2b重組蛋白,且該蛋白具有免疫反應(yīng)性。
【作者單位】： 吉林大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 犬惡絲蟲 酪蛋白激酶β亞基 原核表達
【基金】：國家科技重大專項(No.2008ZX10401-B)~~
【分類號】：R346
【正文快照】： 犬惡絲蟲病是由犬惡絲蟲(Dirofilaria immitis)的成蟲寄生于犬的右心室和肺動脈內(nèi),直接導(dǎo)致患犬形成機械性栓塞,最終導(dǎo)致呼吸、循環(huán)和泌尿系統(tǒng)嚴(yán)重?fù)p傷的寄生蟲病[1,2]。犬科和貓科動物是犬惡絲蟲的天然宿主,其他30余種野生動物亦可作為其終末宿主[3,4]。人可被感染犬惡絲蟲的

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本文編號：577714