本文關(guān)鍵詞：人源肝癌組織原位荷瘤小鼠模型的建立與應(yīng)用

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【摘要】：原發(fā)性肝細(xì)胞癌是一種世界性的健康困擾,每年因之而致死的人數(shù)在所有癌癥之中也高居前列。尤其在中國(guó)及東亞大多數(shù)地區(qū),每年因乙型肝炎病毒的流行而引發(fā)肝炎,并最終導(dǎo)致肝細(xì)胞癌發(fā)生的病例數(shù)相當(dāng)驚人。然而乙型肝炎病毒入侵機(jī)體后,如何引發(fā)肝臟的炎癥-癌癥的轉(zhuǎn)化鏈的具體機(jī)制尚不明朗。通過動(dòng)物模型來對(duì)特定疾病進(jìn)行研究,這是當(dāng)前最有效的研究疾病發(fā)生發(fā)展過程的手段。因此,只有建立合適的動(dòng)物模型,才能對(duì)肝癌進(jìn)行深入的研究。但是,目前廣泛使用的利用肝癌細(xì)胞系對(duì)動(dòng)物進(jìn)行建模的方法有其缺陷。因?yàn)榧?xì)胞系在長(zhǎng)期體外傳代的過程中,已經(jīng)喪失了一些臨床上肝細(xì)胞癌的特性,故而難以全面地反映病人的真實(shí)生理狀態(tài)。我們?cè)趯?duì)前人工作進(jìn)行分析總結(jié)后,通過使用人來源的肝癌組織對(duì)免疫缺陷的小鼠進(jìn)行荷瘤建模,并最終構(gòu)建起病人來源的腫瘤組織肝原位的荷瘤小鼠模型用于后續(xù)研究。這樣構(gòu)建起來的人源肝癌組織原位荷瘤小鼠,可以進(jìn)行肝癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制研究,并可以用于新型藥物篩選以及新型治療手段的探究。本項(xiàng)研究中,我們研究了人源腫瘤組織原位移植瘤荷瘤小鼠的構(gòu)建方法以及該模型的應(yīng)用價(jià)值。首先,我們將病人來源的新鮮肝癌組織處理后,向非肥胖型糖尿病重癥聯(lián)合免疫缺陷缺陷(NOD-SCID)小鼠皮下注射的方法,篩選可以在小鼠體內(nèi)嵌合生長(zhǎng)的腫瘤組織。收獲腫瘤組織,將之在后續(xù)NOD-SCID小鼠皮下傳代三代。此后,收獲腫瘤組織向后續(xù)小鼠肝內(nèi)進(jìn)行荷瘤嘗試,篩選出能成功荷瘤的小鼠,收獲組織繼續(xù)進(jìn)行荷瘤建模。同時(shí),我們收獲腫瘤組織用于組織學(xué)檢驗(yàn),以確定其與所來源的病人腫瘤組織的相似性。結(jié)果表明我們成功建立了一例人源肝癌組織的肝原位荷瘤小鼠模型,并且對(duì)于其腫瘤組織進(jìn)行了病理學(xué)鑒定,證明了其與所來源的病人組織的相似性。在上述動(dòng)物模型中,待腫瘤組織傳經(jīng)多代性質(zhì)穩(wěn)定后,我們研究了其在篩選藥物與新興免疫治療方面的應(yīng)用。我們使用了臨床常用的抗癌藥物索拉菲尼(Sorafenib)采用每千克體重每天40毫克的劑量,對(duì)肝內(nèi)荷瘤三周后的原位移植瘤嵌合體模型小鼠給藥。治療三周后,我們觀察到小鼠肝內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)被顯著抑制.細(xì)胞生物治療是目前國(guó)際研究熱點(diǎn)。我們采用了人自然殺傷(Natural Killer,NK)細(xì)胞的細(xì)胞系NK92細(xì)胞和NKG細(xì)胞分別對(duì)肝原位移植瘤嵌合體模型小鼠給于腹腔注射1×1 07個(gè)NK92(或NKG)細(xì)胞；每周3次,共計(jì)8次的NK細(xì)胞免疫治療,以觀察新型的細(xì)胞治療方法對(duì)荷瘤小鼠是否存在一定的治療作用。結(jié)果表明在NK92細(xì)胞的治療腫瘤生長(zhǎng)被顯著抑制,但NKG治療組未發(fā)現(xiàn)明顯的腫瘤生長(zhǎng)抑制現(xiàn)象。上述結(jié)果提示我們構(gòu)建的肝原位移植瘤嵌合體模型為藥物篩選、藥效的觀察以及新型療法的探索提供了一個(gè)很好的平臺(tái)。
【關(guān)鍵詞】：人源肝癌組織 肝原位荷瘤小鼠 組織相似性 藥物篩選
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7;R-332
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-13
• 第1章 緒論13-35
• 1.113-26
• 1.1.1 原發(fā)性肝細(xì)胞癌危害及致病因素13-16
• 1.1.2 慢性肝炎病毒感染與肝細(xì)胞癌16-21
• 1.1.3 肝細(xì)胞癌的治療策略與治療前景21-26
• 1.226-33
• 1.2.1 建立腫瘤動(dòng)物模型的必要性26
• 1.2.2 常見的肝細(xì)胞癌動(dòng)物模型26-33
• 1.2.2.1 化學(xué)試劑誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌動(dòng)物模型27-29
• 1.2.2.2 肝細(xì)胞癌動(dòng)物荷瘤嵌合體模型29-31
• 1.2.2.3 遺傳修飾的肝細(xì)胞癌動(dòng)物模型31-33
• 1.3 結(jié)語(yǔ)33-35
• 第2章 人源肝癌組織原位荷瘤小鼠模型的建立與應(yīng)用35-56
• 2.1 引言35-37
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法37-45
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料37-38
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)器材38-40
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)方法40-45
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果45-54
• 2.3.1 人源腫瘤組織荷瘤嵌合體模型構(gòu)建45-47
• 2.3.2 人源腫瘤組織荷瘤后小鼠狀態(tài)監(jiān)測(cè)47-48
• 2.3.3 荷瘤嵌合體小鼠腫瘤組織病理檢測(cè)48-50
• 2.3.4 索拉菲尼治療原位移植瘤動(dòng)物模型50-52
• 2.3.5 免疫細(xì)胞治療原位移植瘤動(dòng)物模型52-54
• 2.4 討論和總結(jié)54-56
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 致謝60-62
• 攻讀碩士學(xué)位期間的主要研究成果62
• 已發(fā)表及待發(fā)表論文或?qū)＠?/span>62

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本文編號(hào)：572889