本文關(guān)鍵詞：甲型副傷寒桿菌pagC基因分布及其重組表達(dá)產(chǎn)物免疫保護(hù)作用

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【摘要】：目的:了解甲型副傷寒沙門菌臨床菌株pagC基因攜帶率及序列保守性,確定甲型副傷寒沙門菌pagC基因原核重組表達(dá)產(chǎn)物rPagC免疫原性和保護(hù)作用。方法:采用PCR及其產(chǎn)物測序了解甲型副傷寒沙門菌臨床菌株pagC基因攜帶率及序列保守性。構(gòu)建甲型副傷寒沙門菌pagC基因原核表達(dá)系統(tǒng),Ni-NTA親和層析法提純表達(dá)的rPagC。采用SDS-PAGE和BioRad凝膠圖象分析系統(tǒng)檢測rPagC表達(dá)情況及其產(chǎn)量。采用免疫擴(kuò)散法、ELISA和Western Blot鑒定其抗原性和免疫反應(yīng)性。采用小鼠感染模型了解rPagC對(duì)甲型副傷寒桿菌感染的免疫保護(hù)效果,微量肥達(dá)試驗(yàn)檢測rPagC免疫小鼠血清凝集傷寒和副傷寒沙門菌的效果。結(jié)果:所有被檢測的甲型副傷寒沙門菌臨床菌株均攜帶pagC基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分別高達(dá)99.1%～100%和98.4%～100%。所構(gòu)建的原核表達(dá)系統(tǒng)能高效表達(dá)rPagC。rPagC免疫家兔可產(chǎn)生高效價(jià)抗體并能與甲型副傷寒桿菌全菌抗血清產(chǎn)生陽性Western雜交信號(hào)。ELISA結(jié)果顯示,97.1%(66/68)甲型副傷寒患者血清標(biāo)本rPagC抗體陽性。100μg和200μg rPagC對(duì)感染小鼠的免疫保護(hù)率分別為73.3%(11/15)和86.7%(13/15)。rPagC免疫小鼠血清對(duì)甲型副傷寒沙門菌和傷寒沙門菌H抗原凝集效價(jià)高達(dá)1∶10～1∶40。結(jié)論:pagC基因在甲型副傷寒沙門菌株中分布廣泛。rPagC有良好的免疫原性及較強(qiáng)的免疫保護(hù)作用,可作為甲型副傷寒桿菌基因工程疫苗候選抗原。
【作者單位】： 溫州醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院和生命科學(xué)學(xué)院;浙江醫(yī)學(xué)高等�？茖W(xué)校;浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： 沙門菌 甲型副傷寒/免疫學(xué) 沙門菌 甲型副傷寒/遺傳學(xué) 基因表達(dá)調(diào)控 細(xì)菌 重組 遺傳 基因表達(dá) pagC基因 重組表達(dá) 免疫原性 免疫保護(hù)性
【基金】：浙江省衛(wèi)生高層次創(chuàng)新人才培養(yǎng)工程資助項(xiàng)目(2012-241) 浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科學(xué)研究基金資助項(xiàng)目(2011KYB006)
【分類號(hào)】：R392.1
【正文快照】： 傷寒沙門菌(Salmonella typhi)感染引起的傷寒以及甲型副傷寒沙門菌(S.paratyphi A)、肖氏沙門菌(S.schottmuelleri)和希氏沙門菌(S.hirschfeldii)感染引起的甲、乙和丙副傷寒是常見消化道傳染病[1]。近年來我國不少地區(qū)甲副傷寒發(fā)病率顯著增高,已替代傷寒成為優(yōu)勢病種[2-3]。

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本文編號(hào)：569646