本文關(guān)鍵詞：白紋伊蚊滯育誘導(dǎo)與判定體系優(yōu)化及其野生種群滯育生態(tài)背景初步調(diào)研

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【摘要】：背景：白紋伊蚊(Aedes albopictus),亦稱亞洲虎蚊(Asian tiger mosquito),是登革病毒、基孔肯雅熱病毒、寨卡病毒等多種病原體的重要傳播媒介,亦是最具生物入侵能力的蚊媒。在中國,白紋伊蚊是登革熱的主要傳播媒介。登革熱至今尚無特效藥物或疫苗,主要治療方法是對癥治療。而對白紋伊蚊進行有效監(jiān)測和控制是現(xiàn)階段預(yù)防登革熱暴發(fā)的主要手段。目前使用的大規(guī)模播撒殺蟲劑、清理孳生地等方法雖在一定程度上降低了白紋伊蚊的密度,但仍未能有效做到在白紋伊蚊活躍期將其密度降低至傳播登革病毒低風險水平。故尋找新型蚊媒防控手段意義重大。溫帶及亞熱帶品系白紋伊蚊具有光周期性滯育特性。滯育賦予白紋伊蚊卵較強的抵抗干燥、寒冷等抗逆能力,白紋伊蚊常以卵期滯育形式跨越冬季等不良生存環(huán)境。卵可附著于輪胎等貨物在商貿(mào)往來中實現(xiàn)白紋伊蚊以及其攜帶的登革病毒的遠程播散,是白紋伊蚊種群實現(xiàn)快速擴張、定殖以及登革病毒等病原體大范圍播散的重要生物學基礎(chǔ)之一。展開白紋伊蚊滯育研究將為探索新型蚊媒控制途徑提供科學依據(jù)。本研究建立并優(yōu)化了廣州野生株和佛山實驗室株的白紋伊蚊滯育誘導(dǎo)體系與滯育判定體系,同時對廣州市野外生境中白紋伊蚊卵滯育本底進行調(diào)研。一 白紋伊蚊滯育誘導(dǎo)與判定體系的優(yōu)化目的優(yōu)化構(gòu)建白紋伊蚊同步產(chǎn)卵誘導(dǎo)體系并對卵胚的發(fā)育進行觀察。同時優(yōu)化白紋伊蚊滯育誘導(dǎo)體系與滯育判定體系以及對短光周期滯育誘導(dǎo)后的產(chǎn)卵后不同天數(shù)的蚊卵滯育率及滯育程度進行測試與評價。方法1. 使用兩種誘卵方式對比,優(yōu)化白紋伊蚊同步誘卵體系：1)黑色仿瓷杯作為誘卵容器、未漂白竹漿紙作為誘卵條件；2)透明塑料碗作為誘卵容器、漂白濾紙作為誘卵紙作為誘卵條件,誘導(dǎo)白紋伊蚊野生株及佛山株進行同步產(chǎn)卵,對同步產(chǎn)卵量進行動態(tài)觀察,對比這兩種誘卵方式對同步產(chǎn)卵效果之間的差異。2.觀察白紋伊蚊卵胚發(fā)育進程,確定白紋伊蚊卵胚發(fā)育階段所對應(yīng)的時期,并與其他蚊種卵胚發(fā)育時期進行比較。3. 從四齡幼蟲期開始施以短光周期(L:D=8:16h)(Light:Dark=8:16h,白晝：黑夜=8小時：16小時)誘導(dǎo)廣州市白紋伊蚊野生株與實驗室長期飼養(yǎng)的佛山株直至其產(chǎn)下滯育卵,構(gòu)建白紋伊蚊滯育誘導(dǎo)體系。4. 使用yeast powder、food slurry與ascorbic acid三種滯育判定方式對7-20d pov (days post-oviposition產(chǎn)卵后天數(shù))的蚊卵進行滯育判定,對比分析三種方法之間滯育發(fā)生率的差別,優(yōu)化白紋伊蚊滯育判定體系。5. 使用yeast powder和food slurry兩種滯育判定方法對白紋伊蚊佛山株7-20dpov、30dpov、45dpov和50d pov4種不同產(chǎn)卵天數(shù)的卵進行滯育的判定,統(tǒng)計學分析不同方法所鑒定的不同時期蚊卵的滯育發(fā)生率。6. 利用SPSS 13.0進行描述性統(tǒng)計分析,組間率的差異使用卡方檢驗,檢驗標準a為0.05,多個樣本間的多重比較采用校正檢驗標準：α'=2a/k(k-1)。作圖采用Graphpad 5.01軟件。結(jié)果：1.野生株使雌蚊啟動產(chǎn)卵后第1 d產(chǎn)卵量從3.4%提高到51%,前3d合計產(chǎn)卵量從30.2%升至97%,總產(chǎn)卵時長從18d縮短至7d；佛山株產(chǎn)卵后第1d產(chǎn)卵量從40%提高到94%,前3d合計產(chǎn)卵量從84%升至99.7%,總產(chǎn)卵時長從13d縮短至5d。2. 對白紋伊蚊卵胚發(fā)育進程的觀察發(fā)現(xiàn)：白紋伊蚊卵胚發(fā)育分為胚盤形成和原腸胚形成、胚帶延伸、胚帶收縮、背向閉合及卵胚發(fā)育結(jié)束5個階段；對比其他蚊種發(fā)現(xiàn),白紋伊蚊卵胚發(fā)育時間較埃及伊蚊與白跗按蚊發(fā)育慢,約12 HAE (hour after egglaying,產(chǎn)卵后小時數(shù))才完全形成原腸胚,60 HAE后,卵胚發(fā)育完成,腹節(jié)明顯。3.優(yōu)化構(gòu)建廣州市白紋伊蚊野生株與實驗室長期飼養(yǎng)佛山株滯育誘導(dǎo)體系,短光周期誘導(dǎo)佛山株滯育發(fā)生率在86.60%～90.76%之間,野生株滯育發(fā)生率在88.64%～97.21%。4. 使用yeast powder、 food slurry與ascorbic acid三種滯育判定方式對白紋伊蚊野生株7-20d pov的蚊卵進行滯育發(fā)生率的判定,發(fā)現(xiàn)不同光周期誘導(dǎo)下所產(chǎn)的蚊卵在三種不同滯育判定方式得到的滯育發(fā)生率總體存在差異(X2=42.13,p0.001; x2=9-7,p=0.008),進一步兩兩比較后發(fā)現(xiàn)滯育判定方式ascorbic acid與yeast powder、food slurry之間均有統(tǒng)計學差異,而yeast powder和food slurry之間無統(tǒng)計學差異。5. 使用yeast powder、food slurry與ascorbic acid三種滯育判定方式對白紋伊蚊佛山株7-20d pov的蚊卵進行滯育發(fā)生率的判定,發(fā)現(xiàn)不同光周期誘導(dǎo)下所產(chǎn)的蚊卵在三種不同滯育判定方式得到的滯育發(fā)生率總體存在差異(x2=65.73,p=0.001:x2=50.28,p0.001),進一步兩兩比較后發(fā)現(xiàn)滯育判定方式ascorbic acid分別與yeast powder、food slurry之間均有統(tǒng)計學差異,而yeast powder和food slurry之間無統(tǒng)計學差異。6. 使用food slurry與yeast powder兩種滯育判定方式在7-20dpov、30dpov兩種天數(shù)下,兩種方法之間判定滯育發(fā)生率無統(tǒng)計學差異(X2=1.2,p=0.274; x2=0.001,p=0.929);而在45d pov和50d pov兩種天數(shù)下,兩種方法之間判定滯育發(fā)生率均呈現(xiàn)統(tǒng)計學差異(X2=35.72,p0.001; x2=16.81,p0.001)。使用yeast powder方法對45d pov和50d pov兩種天數(shù)的蚊卵進行滯育判定,滯育率發(fā)生率較低。7.使用yeast powder作為滯育判定方式時,四種不同天數(shù)蚊卵滯育率總體均呈現(xiàn)顯著性差異(χ2=128.61,p0.001),進一步兩兩比較后發(fā)現(xiàn)7-20d pov與30d pov之間滯育率無統(tǒng)計學差異,而7-20d pov和30d pov分別與45d pov、 50d pov之間滯育率均呈現(xiàn)統(tǒng)計學差異。對于使用food slurry作為滯育判定方式時,也呈現(xiàn)同樣的結(jié)果。結(jié)論1.使用黑色仿瓷杯作為誘卵容器、未漂白竹漿紙作為誘卵條件,白紋伊蚊野生株和佛山株均可獲得顯著提升的同步誘卵效果,且佛山株效果更為顯著。白紋伊蚊卵胚發(fā)育時期較其他蚊種發(fā)育時間更長。2.在溫度21℃,濕度(80±5)%,短光周期(L：D=8：16h)的條件下可誘導(dǎo)廣州市白紋伊蚊野生株與實驗室長期飼養(yǎng)佛山株產(chǎn)下滯育卵,滯育發(fā)生率達到86.60%～97.21%。3. 使用yeast powder和food slurry兩種滯育判定方式均可判定滯育卵。4. 短光周期誘導(dǎo)所產(chǎn)下7-20d pov和30d pov的白紋伊蚊卵處在滯育階段中。5. yeast powder方法判定滯育時,45d pov與50d pov的滯育發(fā)生率較food slurry判定方法更低。二廣州市白紋伊蚊野生種群滯育生態(tài)背景初步調(diào)研目的調(diào)查廣州市白紋伊蚊蚊蟲密度季節(jié)消長,分析溫度、降雨量及日照長短對于白紋伊蚊種群密度的影響,并同步探究白紋伊蚊滯育本底。方法1.在廣州市6個區(qū)(越秀區(qū)、天河區(qū)、蘿崗區(qū)、白云區(qū)、花都區(qū)、從化區(qū))共24個調(diào)研點每處放置誘蚊誘卵器各50個,每個誘蚊誘卵器中加入1/3的隔夜自來水,并將白色濾紙放于其底部的橢圓形突起處備用。在監(jiān)測點光線良好的花樹葉陰下每25-30米距離布放一個誘蚊誘卵器,放后第4天回收,記錄所誘蚊蟲數(shù)及卵陽性數(shù),計算誘蚊誘卵器指數(shù)(MOI)。2. 在調(diào)研點采用人誘法對白紋伊蚊種群成蚊的密度進行調(diào)查。選擇遮陰處為檢測地點。在蚊蟲刺叮高峰期,監(jiān)測者暴露一側(cè)小腿,靜止不動,記錄30min內(nèi)停落在小腿上用電動吸蚊器捕獲的雌性蚊蟲數(shù)量。記錄誘蚊開始與結(jié)束的時間、地點、溫度和濕度。計算誘蚊密度指數(shù)(MDI)。3.每月在調(diào)研點展開孳生地調(diào)查。檢測人手持GPS記錄儀(GARMIN Corporation, Taibei, Taiwan),沿監(jiān)測路徑,以均勻步伐前進,記錄沿途發(fā)現(xiàn)幼蟲(蛹)陽性容器數(shù)和陽性積水處數(shù)。計算路徑指數(shù)(RI)。4.采用方差分析、Pearson相關(guān)、Spearman秩相關(guān)和多重線性回歸分析探索不同城市化地區(qū)以及氣象因素對MOI、MDI以及對的影響,同時分析MOI、MDI以及RI之間的相互關(guān)系。5.誘蚊誘卵器中沉渣卵的收集：回收2015年2月～2016年1月每月放置野外的誘蚊誘卵器,在實驗室繼續(xù)放置10日,去掉上清液短暫離心后在體視顯微鏡下分離沉渣獲取蟲卵并計數(shù)。6.野外孳生地白紋伊蚊卵的收集：2016年1月與2月份在陽性孳生地容器(在以往月份中均為陽性孳生地,1月與2月未見陽性)內(nèi)側(cè)使用眉筆刷取容器貼壁蟲卵。7. 使用yeast powder作為滯育判定方式對所收集的白紋伊蚊卵進行滯育判定。8.利用SPSS 13.0進行統(tǒng)計分析,檢驗標準a為0.05。計量資料組間差異采用t檢驗和方差分析,采用LSD進行組間兩兩比較。作圖采用Graphpad 5.01軟件。結(jié)果1. 四種生態(tài)環(huán)境(工地、公園、居民區(qū)和學校)的MOI高峰均出現(xiàn)在5、6月份,其中學校MOI的中位數(shù)在6月達到最高,高達55%。2.工地、公園、居民區(qū)和學校的MDI高峰出現(xiàn)時間略有不同,其中工地MDI的高峰出現(xiàn)在5、6月份,公園MDI的高峰出現(xiàn)在5-7月,居民區(qū)MDI在5-10月較大,學校MDI的高峰出現(xiàn)在5月份。工地5、6月份的MDI中位數(shù)較大,分別為25只/人/h和20只/人/h。3.工地、公園、居民區(qū)和學校的對的高峰出現(xiàn)時間略有不同,其中居民區(qū)和學校的RI高峰出現(xiàn)在5月份,公園的RI在9、10月份較大,工地的RI在3-9月較大。4.中心城區(qū)、邊郊區(qū)和農(nóng)村地區(qū)三者之間RI值存在顯著差異(F=4.818,p=0.02),兩兩比較發(fā)現(xiàn),農(nóng)村地區(qū)RI顯著高于中心城區(qū)和郊區(qū)。5.MOI與月最高平均氣溫、月平均氣溫、月最低氣溫、月平均降水量和月平均日照時長均存在正相關(guān)關(guān)系,而MDI則與月最高平均氣溫、月平均氣溫、月最低氣溫和月平均日照時長呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系；RI僅與月平均日照時長存在正相關(guān)關(guān)系。6. 相關(guān)分析結(jié)果顯示,ADI和RI之間,ADI和MOI之間均具有很強的正相關(guān)性(r=0.818,p=0.001；r=0.930,p0.001)；而RI和MOI之間具有較強的正相關(guān)性(r=0.634,p=0.027)。7. 誘蚊誘卵器獲得白紋伊蚊卵越秀區(qū)44粒,天河區(qū)43粒,白云區(qū)214粒,蘿崗區(qū)244粒,花都區(qū)169粒,從化區(qū)137粒,六區(qū)共計851粒。7月份在天河區(qū)發(fā)現(xiàn)1粒滯育卵；8月份在蘿崗區(qū)發(fā)現(xiàn)1粒滯育卵,花都區(qū)發(fā)現(xiàn)2粒滯育卵：9月份在越秀區(qū)發(fā)現(xiàn)2粒滯育卵,蘿崗區(qū)發(fā)現(xiàn)1粒,花都區(qū)發(fā)現(xiàn)1粒；11月份在花都發(fā)現(xiàn)1粒滯育卵；12月份在花都發(fā)現(xiàn)1粒滯育卵。使用yeast powder進行滯育判定后確定滯育卵為9粒。8.2016年1月份和2月份野外孳生地采集白紋伊蚊卵各獲得卵69和82粒。使用yeast powder方式進行滯育判定后確定滯育卵為12粒。結(jié)論1. 四種生態(tài)環(huán)境(工地、公園、居民區(qū)和學校)的MOI、MDI與RI均隨著季節(jié)的變換呈現(xiàn)不同的消長趨勢。2.月最高平均氣溫、月平均氣溫、月最低氣溫、月平均降水量和月平均日照時長對白紋伊蚊產(chǎn)卵有一定的影響,而降雨量與成蚊密度相關(guān)性不高,僅平均日照時長與幼蟲孳生地數(shù)量有關(guān)。3. MOI、MDI與RJ三者之間呈現(xiàn)較強的相關(guān)性。4.廣州市白紋伊蚊野生株以滯育和靜息結(jié)合的方式越冬。
【關(guān)鍵詞】：白紋伊蚊 滯育 光周期 靜息 誘蚊密度指數(shù) 路徑指數(shù) 誘蚊誘卵指數(shù)
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R384.1
【目錄】：

• 摘要3-10
• ABSTRACT10-20
• 第一章 白紋伊蚊滯育誘導(dǎo)與判定體系的優(yōu)化20-43
• 前言20-23
• 1 白紋伊蚊同步產(chǎn)卵誘導(dǎo)體系的優(yōu)化及其卵胚發(fā)育的觀察23-32
• 1.1 引言23-24
• 1.2 材料24
• 1.3 方法24-26
• 1.4 結(jié)果26-30
• 1.5 討論30-32
• 2 白紋伊蚊滯育誘導(dǎo)與判定體系優(yōu)化32-43
• 2.1 引言32
• 2.2 材料32-33
• 2.3 方法33-35
• 2.4 結(jié)果35-40
• 2.5 討論40-43
• 第二章 廣州市白紋伊蚊野生種群滯育生態(tài)背景初步調(diào)研43-70
• 1 前言43-45
• 2 廣州白紋伊蚊野生種群生態(tài)調(diào)研監(jiān)測點的選擇45-48
• 3 材料48
• 4 方法48-51
• 5 結(jié)果51-66
• 6 討論66-69
• 7 小結(jié)69-70
• 全文小結(jié)70-71
• 參考文獻71-76
• 中英文縮略詞表76-77
• 碩士期間論文發(fā)表情況77-78
• 致謝78-80

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本文編號：564591