本文關(guān)鍵詞：感染過(guò)程中鉤端螺旋體外膜蛋白抗原表達(dá)水平變化及其調(diào)控機(jī)制

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【摘要】：目的了解感染人巨噬細(xì)胞過(guò)程中間號(hào)鉤端螺旋體(簡(jiǎn)稱鉤體)黃疸出血群賴型賴株主要外膜蛋白(OMP)抗原表達(dá)水平變化及其OmpR相關(guān)基因調(diào)控機(jī)制。 方法采用生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測(cè)問(wèn)號(hào)鉤體賴株OmpR及其組氨酸激酶(HK)基因和結(jié)構(gòu)功能域。采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)鉤體感染人THP-1巨噬細(xì)胞前后鉤體主要OMP編碼基因mRNA水平的變化。采用HK胞外區(qū)多肽抗血清封閉試驗(yàn)及氯氰碘柳胺阻斷試驗(yàn),檢測(cè)OmpR及其HK對(duì)感染過(guò)程中問(wèn)號(hào)鉤體OMP編碼基因mRNA水平變化的影響。 結(jié)果生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示,LB015和LB333可能是問(wèn)號(hào)鉤體賴株OmpR編碼基因,LB014可能是其HK編碼基因。問(wèn)號(hào)鉤體賴株感染THP-1細(xì)胞后,lipL21、 lipL32、lipL41基因mRNA水平迅速并持續(xù)下降(P0.01), groEL、mce、loa22、 ligB基因mRNA水平瞬時(shí)迅速升高(P0.01)。氯氰碘柳胺或HK抗血清處理可使感染THP-1細(xì)胞而顯著下降的問(wèn)號(hào)鉤體lipL21和lipL48基因mRNA水平明顯回升(P0.01),氯氰碘柳胺處理可使感染THP-1細(xì)胞而顯著升高的groEL、mce、 loa22、ligB基因mRNA水平明顯下降(P0.01)。 結(jié)論問(wèn)號(hào)鉤體賴株感染人巨噬細(xì)胞后主要OMP抗原表達(dá)水平發(fā)生明顯變化。問(wèn)號(hào)鉤體賴株染色體中存在一組編碼OmpR及其HK的基因,其主要功能可能是下調(diào)感染過(guò)程中部分OMP抗原表達(dá)水平。
【關(guān)鍵詞】：問(wèn)號(hào)鉤端螺旋體 感染 外膜蛋白 表達(dá) OmpR 氯氰碘柳胺
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：S852.61
【目錄】：

• 致謝5-7
• 摘要7-8
• Abstract8-12
• 1 引言12-14
• 2 材料和方法14-33
• 2.1 主要試劑和來(lái)源14-15
• 2.2 主要溶液、培養(yǎng)基配制15-16
• 2.3 主要儀器設(shè)備16
• 2.4 細(xì)胞株及培養(yǎng)16-17
• 2.5 細(xì)菌株及培養(yǎng)17
• 2.6 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物17
• 2.7 OmpR及其相關(guān)HK基因預(yù)測(cè)與結(jié)構(gòu)分析17-18
• 2.8 多肽合成18
• 2.9 抗血清制備18
• 2.10 ELISA測(cè)定抗血清效價(jià)18-19
• 2.11 鉤體感染細(xì)胞模型19
• 2.12 OmpR相關(guān)HK封閉試驗(yàn)19-20
• 2.13 氯氰碘柳胺阻斷試驗(yàn)20
• 2.14 鉤體總RNA的提取及cDNA合成20-22
• 2.15 靶基因mRNA水平檢測(cè)22-25
• 2.16 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法25
• 2.17 OmpR及其相關(guān)HK基因的克隆及其原核表達(dá)25-28
• 2.18 自殺質(zhì)粒的構(gòu)建28-33
• 3 結(jié)果33-43
• 3.1 OmpR基因預(yù)測(cè)和分析結(jié)果33-34
• 3.2 HK基因預(yù)測(cè)和分析34-35
• 3.3 LB014-胞外多肽抗血清制備及其效價(jià)測(cè)定35
• 3.4 感染細(xì)胞前后鉤體TCSS基因mRNA水平變化35-38
• 3.5 感染后mRNA水平下調(diào)或無(wú)明顯變化的OMP編碼基因38-40
• 3.6 感染后mRNA水平上調(diào)的OMP編碼基因40-41
• 3.7 自殺質(zhì)粒的構(gòu)建41
• 3.8 OmpR及其相關(guān)HK基因的克隆及其原核表達(dá)41-43
• 4 討論43-46
• 5 結(jié)論46-47
• 6 參考文獻(xiàn)47-52
• 綜述52-59
• 參考文獻(xiàn)56-59
• 作者簡(jiǎn)歷及在讀研期間所取得的科研成果59

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