本文關(guān)鍵詞：日本血吸蟲TOM34基因的克隆和表達(dá)分析

  更多相關(guān)文章： 日本血吸蟲 線粒體外膜轉(zhuǎn)運(yùn)酶 克隆 表達(dá) 免疫定位

【摘要】：目的克隆、表達(dá)日本血吸蟲線粒體外膜轉(zhuǎn)運(yùn)酶34基因(SjTOM34),并對其生物特性進(jìn)行初步研究。方法應(yīng)用RT-PCR方法從42d日本血吸蟲成蟲cDNA中擴(kuò)增SjTOM34基因,并進(jìn)行生物信息學(xué)分析。應(yīng)用實(shí)時定量RT-PCR方法分析了SjTOM34基因在日本血吸蟲不同發(fā)育階段蟲體中的表達(dá)狀況。構(gòu)建了SjTOM34基因重組原核表達(dá)質(zhì)粒,并在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá),Western blotting分析了重組抗原的免疫原性及該蛋白在不同發(fā)育階段蟲體中的表達(dá)情況,利用免疫組化方法觀察了該蛋白在蟲體內(nèi)的分布情況。結(jié)果獲得了SjTOM34的基因序列,其開放閱讀框(ORF)為1 083bp。該基因在所檢測的不同發(fā)育階段童蟲和成蟲中均有表達(dá),其中在35d蟲體中的表達(dá)量略高于其他時期的蟲體。成功構(gòu)建了重組的原核表達(dá)質(zhì)粒并且在大腸桿菌中獲得表達(dá),重組蛋白在上清和沉淀中都有存在,并且具有較好的免疫原性,在所檢測的各時期蟲體中均可檢測到該蛋白的存在,并且主要分布在蟲體的實(shí)質(zhì)組織中。結(jié)論獲得了日本血吸蟲SjTOM34基因,初步明確了該基因在日本血吸蟲童蟲和成蟲中的表達(dá)情況,及在成蟲中的分布。
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所 農(nóng)業(yè)部動物寄生蟲學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室 國家防治動物血吸蟲病專業(yè)實(shí)驗(yàn)室;南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 日本血吸蟲 線粒體外膜轉(zhuǎn)運(yùn)酶 克隆 表達(dá) 免疫定位
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.31172315) 公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))專項(xiàng)(No.200903036) 中國博士后科學(xué)基金(No.2012M510630)聯(lián)合資助~~
【分類號】：R383.2
【正文快照】： Cloning,expression and characterization of a gene encoding translocaseof the outer mitochondrial membrane 34(TOM34)in Schistosoma japonicumHONG Yang1,LI Xue-zhen1,2,FU Zhi-qiang1,SHI Yao-jun1,LU Ke1,YANG Jian-mei 1,ZHU Chuan-gang1,YUAN Chun-xiu1,LI Hao1,

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本文編號：561958