本文關(guān)鍵詞：T細(xì)胞活化連接蛋白脂筏定位功能缺失影響T細(xì)胞內(nèi)CD59信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的功能

  更多相關(guān)文章： CD T細(xì)胞活化連接蛋白 棕櫚�；� T淋巴細(xì)胞

【摘要】：目的用前期構(gòu)建好的T細(xì)胞活化連接蛋白(LAT)-EGFP質(zhì)粒,基因點(diǎn)突變技術(shù)使LAT-EGFP的棕櫚�；稽c(diǎn)突變,使LAT-EGFP-M(棕櫚酰化位點(diǎn)突變的LAT-EGFP)的細(xì)胞膜定位功能缺失,抗體交聯(lián)CD59后觀察T細(xì)胞信號(hào)活化狀態(tài)的改變。方法采用電轉(zhuǎn)染的方法轉(zhuǎn)染Jurkat細(xì)胞,抗體交聯(lián)CD59后,共聚焦熒光顯微鏡下觀察LAT分布情況的變化;用噻唑藍(lán)(MTT)比色法檢測(cè)抗體交聯(lián)前后各組Jurkat細(xì)胞增殖情況差別;應(yīng)用ELISA檢測(cè)各組細(xì)胞上清中IL-2的變化水平;用Western blot技術(shù)檢測(cè)抗體交聯(lián)后LAT-EGFP和LAT-EGFP-M的磷酸化程度。結(jié)果抗體交聯(lián)CD59之后,LAT-EGFP-M較LAT-EGFP相比不能定位聚集于CD59所在的脂筏區(qū)域,并且轉(zhuǎn)染了突變LAT-EGFP-M質(zhì)粒的Jurkat細(xì)胞增殖速度和IL-2分泌能力低于轉(zhuǎn)染LAT-EGFP質(zhì)粒、轉(zhuǎn)染空載體EGFP-N3及未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。LAT-EGFP-M的磷酸化程度遠(yuǎn)低于LAT-EGFP。結(jié)論棕櫚酰化位點(diǎn)缺失的LAT會(huì)減弱CD59在T細(xì)胞中的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能。
【作者單位】： 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： CD T細(xì)胞活化連接蛋白 棕櫚�；� T淋巴細(xì)胞
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81273206)
【分類號(hào)】：R392.1
【正文快照】： CD59為相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)為18 000~20 000大小的糖蛋白,其主要作用是在攻膜復(fù)合物(membraneattack complex,MAC)裝配過程中,與C8和C9結(jié)合抑制補(bǔ)體的活化[1]。CD59除了可以調(diào)節(jié)補(bǔ)體活性外,脂筏內(nèi)的糖基磷脂酰肌醇(glycosyl phosphatidylinositol,GPI)錨固蛋白能夠發(fā)揮信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)

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本文編號(hào)：556994